白芷香豆素類成分的提取分離和鑒定

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1、白芷香豆素類成分的提取分離和鑒定二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.學(xué)習(xí)用有機(jī)溶劑提取香豆素類成分的方法。2.學(xué)習(xí)用柱層析色譜分離香豆素類化合物的方法。三、實(shí)驗(yàn)操作（一）總提取物的制備取白芷生藥粗粉200g，用石油醚-丙酮（4:1）回流提取3次，每次250ml，分別提取2,1,1h，合并提取液，回收溶劑至干，得總提取物月2.5g。（二）柱層析色譜分離取總提取物1.5g，用5g硅膠吸附，在25×4cm的色譜柱上干法上樣，進(jìn)行低壓柱層析色譜。色譜條件：吸附劑：硅膠H20g（薄層色譜用）洗脫劑：石油醚-丙酮8:1，6:1，4:1，3:1各80ml。壓力：0.5~0

2、.7kg/cm2收集：5~8ml/份用下述薄層色譜條件進(jìn)行檢識(shí)，將相同斑點(diǎn)的流分合并，用石油醚-乙酸乙酯（8:2）的溶劑重結(jié)晶1~2次，分別得到單體化合物，測(cè)定熔點(diǎn)。（三）鑒定1.薄層色譜吸附劑：硅膠（薄層色譜用）展開(kāi)劑：（1）石油醚-丙酮8:2；（2）苯-乙酸乙酯8:2樣品：白芷總提取物，異歐前胡素，歐前胡素標(biāo)準(zhǔn)品：異歐前胡素，歐前胡素顯色：紫外燈（365nm）下觀察熒光。2.光譜測(cè)定1H-NMR譜：用CDCl3作為溶劑。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握連續(xù)回流提取法的原理和方法；2.掌握重結(jié)晶的原理和方法二、實(shí)驗(yàn)原理白芷為傘型科植物白芷的干燥根。

3、具有散風(fēng)除濕、通竅止痛、消腫排膿的功能。白芷中的有效成分為香豆素類化合物。用單位白芷的提取物（其中主要是香豆素類化合物）制成的制劑對(duì)功能性頭痛、白癜風(fēng)的臨床療效較好。異歐前胡素和歐前胡素為白芷的主要有效成分。常見(jiàn)的提取方法有：溶劑提取法、水蒸氣蒸餾法、升華法。其中，溶劑提取法應(yīng)用最廣。溶劑提取法的原理：根據(jù)相似相溶原理，選擇與化合物極性相當(dāng)?shù)娜軇⒒衔飶闹参锝M織中溶解出來(lái)，同時(shí)，由于某些化合物的增溶或助溶作用，其極性與溶劑極性相差較大的化合物也可溶解出來(lái)。溶劑提取法一般包括浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法、連續(xù)回流提取法等，其實(shí)用反胃

4、和特點(diǎn)各有所不同。連續(xù)回流提取法具有提取效率高、溶劑用量少等優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)利用連續(xù)回流提取法提取白芷中的香豆素。三、試劑與儀器試劑：乙醇，白芷粗粉，石油醚，乙醚，蒸餾水，丙酮。儀器：燒杯，圓底燒瓶，三角燒瓶，索氏提取器，電子天平，恒溫水浴，硅膠薄層板，色譜缸，球形冷凝管，真空泵。四、實(shí)驗(yàn)步驟與記錄⑴．白芷中香豆素的提取取白芷粗粉30g，置于索氏提取器中，加入95%的乙醇300ml，80℃恒溫水浴回流2h，提取液減壓濃縮至糖漿狀。用丙酮溶解并轉(zhuǎn)移至50ml三角燒瓶中，放置結(jié)晶，抽濾后，再重結(jié)晶，所得產(chǎn)品干燥稱重，計(jì)算得率。⑵．產(chǎn)品的薄層色譜鑒

5、定色譜材料：硅膠薄層板點(diǎn)樣：產(chǎn)品，歐前胡素和異歐前胡素標(biāo)準(zhǔn)品。展開(kāi)劑：石油醚-乙醚1:1顯色：置紫外光燈（365nm）下，觀察斑點(diǎn)顏色。展開(kāi)方式：預(yù)飽和后，上行展開(kāi)。五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理及結(jié)果①．索氏提取兩個(gè)小時(shí)后得到棕色的澄明液體，真空抽提后得到深棕色的糖漿狀濃稠液體。丙酮轉(zhuǎn)移靜置后析出淡黃色晶體，精制后得到白色晶體。香豆素樣品中含有歐前胡素和異歐前胡素兩種物質(zhì)，并且還含有其他兩種未知物質(zhì)，在紫外光照射下顯紫色②.產(chǎn)品為無(wú)色晶體。六、注意事項(xiàng)抽濾操作要小心，以免倒吸。六、問(wèn)題討論1)連續(xù)回流提取法的原理是什么？有何特點(diǎn)？答：原理：將裝好藥材

6、粉末的濾紙袋中藥粉高度應(yīng)低于虹吸管頂部，自冷凝管家溶劑入燒瓶?jī)?nèi)，水浴加熱。溶劑受熱蒸發(fā)，遇冷后變?yōu)橐后w回滴入提取器中，接觸藥材開(kāi)始進(jìn)行浸提，待溶劑液面高于虹吸管上端時(shí)，在虹吸作用下，浸出液體流入燒瓶，溶劑在燒瓶?jī)?nèi)因受熱繼續(xù)氣化蒸發(fā)，而被提取的藥物被溶劑帶入燒瓶?jī)?nèi)逐漸累積。特點(diǎn)：不斷循環(huán)利用提取藥物的溶劑，可使溶劑的利用率提高2)對(duì)比浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法和連續(xù)回流提取法的使用范圍和特點(diǎn)答：浸漬法適用于對(duì)熱不穩(wěn)定的成分及含大量淀粉、樹(shù)膠、果膠、黏液質(zhì)中藥的提取特點(diǎn)：本法簡(jiǎn)單可行，但浸出率低，如用水注意防腐滲漉法適用于貴重藥材、毒

7、性藥材及高濃度制劑；也可用于有效成分含量較低的藥材提取。特點(diǎn)：溶劑利用率高，有效成分浸出完全，可直接收集浸出液，該法常用不同濃度的乙醇或白酒做溶劑，故應(yīng)防止溶劑的揮發(fā)損失。煎煮法煎煮法適用于有效成分能溶于水，且對(duì)濕、熱均穩(wěn)定的藥材。特點(diǎn)：該法浸提成分范圍廣，但往往雜質(zhì)較多，給精制帶來(lái)不利，且煎出液易霉敗變質(zhì)。④回流提取法適用于對(duì)熱穩(wěn)定的成分。特點(diǎn)：提取效率高；溶劑消耗量大。⑤連續(xù)回流提取法適用于對(duì)熱穩(wěn)定的成分。特點(diǎn)：提取效率最高；節(jié)省溶劑；提取時(shí)間較長(zhǎng)?；亓魈崛》ㄊ怯靡掖嫉纫讚]發(fā)的有機(jī)溶劑提取原料成分，將浸出液加熱蒸餾，其中揮發(fā)性溶劑餾出

8、后又被冷卻，重復(fù)流回浸出容器中浸提原料，這樣周而復(fù)始，直至有效成分回流提取完全的方法。回流法提取液在蒸發(fā)鍋中受熱時(shí)間較長(zhǎng)，故不適用于受熱易遭破壞的原料成分的浸出?；亓鞯哪康氖菫榱斯?jié)省溶劑。乙醇