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《幾種生物堿基的反相高效液相色譜分離及人尿中尿嘧啶和腺嘌呤的測定》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、.。Vol12分析科學(xué)學(xué)報(bào)No11996幾種生物堿基的反相高效液相色譜分離及人尿中尿嚓咤和腺嘿嶺的測定’關(guān)關(guān)石義林“韓金土氣劉缽春程介充,,(武漢大學(xué)化學(xué)系武漢刁30072),;一.,文報(bào)道在比:KHO‘摘要本SpherisorbC柱上以HPO刃溶液作流動相(PH40)同時分離和瀏定胞啥吮、尿咄吮、腳腺咭吮、腺嗦吟5,,和黃嗦吟種生物城墓用于人尿分析標(biāo)準(zhǔn)加入回收率在92.5~105.5%之問.關(guān)鍵詞反相HPLC生物城基尿,研究生物堿基的分離和測定有助于研究人體內(nèi)核酸的代謝過程并能預(yù)示某些病變.,,的發(fā)生在生化和臨床醫(yī)學(xué)上都
2、有十分重要的意義近年來反相高效液相色譜法分離和,,測定生物堿基的文章時有報(bào)道〔一幻大多采用在流動相中加入不同的有機(jī)改性劑或梯度:一:‘,,淋洗技科,j.本文僅以H護(hù)。KHPO緩沖溶液作流動相(pH4.0)用恒濃度淋洗法可同、.、a、時分離和測定胞嗜咤(cyt)尿啥健(ura)黃嗓嶺(xn)胸腺吻睫(y)和腺嗦吟(Ade)Th方、、,,92.5一法簡單快速靈敏用于人尿中尿嗜睫和腺喋嶺的分析標(biāo)準(zhǔn)加入回收率在工05.5%之間·實(shí)驗(yàn)部分1儀器與試劑一、一、一島津Lc6A高效液相色譜儀cR3A記錄儀sPD6Av紫外檢測器舊本);超聲
3、波清,...,.;sprrbe;:5協(xié)m150又4d洗器(上海超聲儀器廠)加iso柱(6mm1大連化學(xué)物理研究所)、、(上;;黃嚓吟胸腺嗜睫胞崛咤海生化試劑廠)尿嗜咤(上海試劑二廠)腺嗦嶺進(jìn)口.:...0ZmolLNa0H,分裝標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液sms/mL除黃嗓吟滴加少量0/溶解外其余均用一一.,2:IO,水溶解儲存于4℃冰箱內(nèi)工作溶液除腺嚓吟的濃度為os/mL外其余均為.,..-z;:3;2飾引。L臨用前取上述儲備溶液稀釋H尹眾KHPO緩沖溶液以0Zmof/LHPO和.,.,0;Zmol/LKH尹。相混合在PH計(jì)上調(diào)節(jié)至所需
4、聲值其他試劑均為分析純水為二次蒸餾水.2實(shí)驗(yàn)方法、、、、.oL)胞吻睫取一定量(20尿咯咤黃嗦嶺胸腺啥咤腺嚓嶺及其混合物注入色譜柱,湖北省自然科學(xué)基金資助課題二湖,*,河南信陽師院化學(xué)系北咸寧教院化學(xué)系:收稿日期1994一12一23一.Hs‘KH:PO。0),H:;KHZPo;100olL,流動相為即緩沖溶液(pH4即和總濃度為m/以.,.,,0smL/min的流速進(jìn)行淋洗檢測波長為260nm柱溫35℃峰面積定量流動相在使用..GS15min,前經(jīng)砂芯漏斗抽濾并超聲脫氣進(jìn)樣前色譜柱預(yù)先用流動相平衡lh結(jié)果與討論1’檢測波長
5、的選擇:,,嗦嶺類和啼咤類化合物均具有共扼離域大鍵結(jié)構(gòu)在紫外光區(qū)有強(qiáng)的光吸收特性..〔‘」26m其最大吸收波長在250~280nm之間本文選擇0n作為檢測波長2流動相的選擇.,2I,其PH值的影響在酸性溶液中本文所研究的化合物均有不同程度的質(zhì)子化難易.:;l,程度依次為腺嗦吟>黃嗦嶺胞喻睫>尿啥睫>胸腺晦咤圖結(jié)果表明當(dāng)PH值一定,,;,,,時化合物的極性越小保留時間越長隨春PH值升高質(zhì)子化程度減弱保留時間增長..,,尤以腺嗓吟最為顯著但當(dāng)pH簇35時各化合物均出現(xiàn)雙峰這可能是由于在較強(qiáng)的,、,酸性條件下嚎嶺崛睫環(huán)上的氮原子
6、質(zhì)子化程度顯著增大而產(chǎn)生兩種形態(tài)從而導(dǎo)致雙..3一.HPZ;峰的出現(xiàn)本文選用PH40的認(rèn)KHPo緩沖溶液(溉一一~~曰~~~一一-一~~.~卜一~目目~~一~‘一-~---~50100150200:.,.HPOKHPO(.月/L).4石5pH.onnn.ph..?！?。”eFig1Ef交ectfPHon比erete加ti姆F始2EfteCtd傭ph扭說如donthC,。,mobilepse,1ommolLH:PO。一KHZPO;reten1“柱ha/枷me.burfersolution;Columntemrature,3
7、5,C,nowChrotograp拍end勝lons:40;theothersaspemaCoPH,,...rate0smL/min;detectionwavelensth260nm;in1瓏.,.ra,.an,.,..t,.,.an,,,,e.1Cyt2U3X刁巧y5A山1仰2Ura3X4Thy5Ad2.2磷酸鹽濃度的影響在10一Zoommol/L范圍內(nèi)試驗(yàn)了磷酸鹽緩沖溶液濃度對保留,.,22,10mmof/L時間的影響結(jié)果如圖由圖可見當(dāng)磷酸鹽濃度低于時腺嚓吟和胞喀,嚨的保留時間隨磷酸鹽濃度的增大而減小;當(dāng)緩沖溶液濃度大
8、于10Ommol/L時各組分飯,10mmol/L的磷酸鹽緩沖溶液4..的值保持恒定本文選用(哪0)作流動相3流速的影響..,.在0一12mL/mi。范圍內(nèi)試驗(yàn)了流動相流速對保留時間的影響結(jié)果見圖3隨著急,.1.0m,流速的增大保留時間幾乎呈線性減小但是當(dāng)流速大于或等于L/m爾時相鄰兩20:,.組分的△t
