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《1真核表達(dá)載體的構(gòu)建》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、第24卷第6期西 安 交 通 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) ( 醫(yī) 學(xué) 版 )Vol.24No.62003年12月JournalofXipanJiaotongUniversity(MedicalSciences)Dec.2003◇論 著◇Anti2CD3scFv2B7.1真核表達(dá)載體的構(gòu)建及在COS27細(xì)胞中的初步表達(dá)1,21111楊章民,孔令洪,來(lái)寶長(zhǎng),王一理,司履生(1.西安交通大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院癌癥研究所,陜西西安 710061;2.陜西師范大學(xué)生命科學(xué)院,陜西西安 710062)摘要:目的 構(gòu)建anti2CD3scFv2B7.1真核表達(dá)載體,并進(jìn)行初步表達(dá)。方法
2、采用重疊延伸拼接法(splicingbyoverlapextention,SOE)將anti2CD3scFv和B7.1(V+C)兩個(gè)基因片段通過(guò)spacer序列連接,將融合基因克隆入T載體,并測(cè)序證實(shí)。在此基礎(chǔ)上構(gòu)建真核表達(dá)載體pcDNA/anti2CD3scFv2B7.1,并經(jīng)脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染COS27細(xì)胞,免疫組織化學(xué)法檢測(cè)表達(dá)。結(jié)果 獲得了序列與預(yù)期完全相同的融合基因;構(gòu)建了抗CD3scFv2B7.1融合基因真核表達(dá)載體;在COS27細(xì)胞中獲得初步表達(dá)。結(jié)論 成功構(gòu)建及表達(dá)抗CD3scFv2B7.1融合基因真核表達(dá)載體,為進(jìn)一步研究抗CD3scFv2B7.1雙功
3、能分子的生物學(xué)活性及用于腫瘤生物治療奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞:抗CD3單鏈抗體;B721;重疊延伸拼接法;真核表達(dá)中圖分類號(hào):Q784;Q786文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):167128259(2003)0620542203Constructionofanti2CD3scFv2B7.1eukaryoticexpressionvectorandpreliminaryexpressioninCOS27cellsYangZhangmin,KongLinghong,LaiBaochang,WangYili,SiLüsheng(InstituteforCancerResearch,Co
4、llegeofLifeScienceandTechnology,Xi’anJiaotongUniversity,Xi’an710061,China)ABSTRACT:ObjectiveToconstructeukaryoticexpressionvectorbearinganti2CD3scFv2B7.1fusiongeneforthefunctionalinvestigationofthefusionprotein.MethodsTwoDNAfragments,anti2CD3scFvandB7.1(V+C),werelinkedthroughaspacer,a
5、ssembledintoafusiongenebySOE(splicingbyoverlapextention)methodandclonedintoT2vector.Basedonthisfusion,eukaryoticexpressionvectorpcDNA/anti2CD3scFv2B7.1wasthencon2structed.LipofectionstrategywassubsequentlyadoptedfortheCOS27transfectionandfusionproteinwasdetectedbyimmunohistochemistry.
6、ResultsRecombinantvectorpcDNA/anti2CD3scFv2B7.1wasobtainedanditsprelimi2naryexpressionwasobservedinCOS27.ConclusionThesuccessfulconstructionandexpressionofpcDNA/anti2CD3scFv2B7.1haslaidfoundationforfurtherstudyonitsbiologicalactivities,functionalassaysandevenfortumorbiotherapy.KEYWORD
7、S:anti2CD3singlechainFvantibodies(anti2CD3scFv);B7.1;splicingbyoverlapextention(SOE);eukaryoticexpression 基于T細(xì)胞的腫瘤免疫治療策略一直是腫瘤免anti2CD3scFv)為基礎(chǔ)構(gòu)建雙功能分子用于抗腫瘤、2疫研究的熱點(diǎn)之一?；罨腡細(xì)胞通常是以MHC抗HIV研究在國(guó)內(nèi)外已屢見報(bào)道,以具有共刺激Ⅰ限制性方式殺傷腫瘤細(xì)胞,而用基因工程構(gòu)建的功能的B7.1分子為基礎(chǔ)的融合蛋白或基因修飾瘤3雙功能抗體靶向的T細(xì)胞以非MHC限制性的方式苗方面的研究也時(shí)有報(bào)道,但抗CD
8、3單鏈抗體
