制藥工程實驗實驗

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1、2009級生物技術《制藥工程實驗》可見分光光度法測定大山楂丸中總黃酮的含量實驗一一、目的要求1、掌握用分光光度法測定藥物中總黃酮含量。2、掌握可見分光光度計的使用方法。二、基本原理大山楂丸由山楂、神曲和麥芽組成，主要功能為開胃消食，其中山楂主要成分為有機酸、黃酮類及多種維生素。黃酮類化合物具有鄰二酚羥基，或3，5位羥基結構，可與鋁鹽、鉛鹽、鎂鹽等金屬鹽類試劑反應，生成有色配合物，可用可見分光光度法測定其含量。本實驗利用黃酮類化合物在亞硝酸鈉的堿性溶液中，與Al3+產(chǎn)生高靈敏度的橙紅色配合物（λmax=510nm），從而用可見分光光度法（比色法）測定大山楂丸中總黃酮

2、的含量。三、儀器與試藥1、可見分光光度計、分析天平、回流提取器。2、乙醇（A.R）、5%亞硝酸鈉溶液、10%硝酸鋁溶液、1mol/l氫氧化鈉溶液。3、蘆丁（中國藥品生物制品檢定所）。4、大山楂丸（市售品）。四、操作步驟1、標準液的配制：精密稱取蘆丁對照品20mg，置100ml容量瓶中，加95%乙醇50ml使溶解，然后加50%乙醇稀釋至刻度，即得0.2mg/ml的對照品溶液。2、標準曲線的制備：精密量取對照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分別置于10ml容量瓶中，各加50%乙醇溶液使成5ml，精密加入5%亞硝酸鈉溶液0.3ml，搖勻，放置6

3、分鐘，加入10%硝酸鋁溶液0.3ml，搖勻，再放置6分鐘，加入1%氫氧化鈉溶液4ml，分別用50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置15分鐘。以第一瓶作空白，用可見分光光度計在510nm處測其吸收度，作A-C標準曲線（或計算其回歸方程）。3、樣品液的制備：精密稱取干燥的大山楂丸9.0g，置回流提取器中，用95%乙醇125ml回流提取1.5小時，提取兩次，合并兩次濾液，減壓濃縮至150ml即得。4、含量測定：精密量取提取液1ml，按上述標準曲線制備方法進行測定，并由標準曲線或回歸方程計算樣品中總黃酮的含量。5、蘆丁的定性反應：取上述提取溶液2ml，加少許鎂粉，再加5滴濃鹽酸

4、，注意觀察顏色變化。五、注意事項1、實驗證明，提取時間為1.5小時，提取兩次，基本能提盡樣品中黃酮。2、實驗證明，樣品顯色后，在30分鐘內測定總黃酮含量，無明顯改變，超過30分鐘，含量有所改變。六、思考題1、比色法操作的注意事項是什么？2、總黃酮與單體黃酮的測定方法有何不同？