組織工程化人工骨修復(fù)兔橈骨骨缺損

《組織工程化人工骨修復(fù)兔橈骨骨缺損》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。

1、組織工程化人工骨修復(fù)兔橈骨骨缺損曲志強陳微微魏東巖劉思佳杜鵬劉海霞(內(nèi)蒙古通遼市醫(yī)院骨三科內(nèi)蒙古通遼028000)【中圖分類號】R68【文獻標(biāo)識碼】A【文章編號】1672-5085(2013)12-0137-02制備磷酸鈣骨水泥(CPC)與骨髓基質(zhì)干細胞(BMSCs)、重組人骨形態(tài)發(fā)牛蛋白-2(rhBMP-2)、堿性成纖維細胞牛長因子(bFGF)復(fù)合物，通過動物實驗研究其對骨缺損的修復(fù)作用。1CPC與rhBMP?2、bFGF復(fù)合把rhBMP-2和bFGF,按適當(dāng)比例加入CPC固化液中，充分混勻。將CPC粉末與含bFGF>rhBMP-2的固化液按固液比mp/vl二4g：lml在

2、瑪瑙研缽中充分調(diào)和成糊狀，制成直徑10mm×4mm×4mm的長方體片,每片含rhBMP-2400ug>bFGF60ngo2CPC、rhBMP?2、bFGF復(fù)合物與骨髓基質(zhì)細胞的復(fù)合把上述制備成的直徑10mm×4mm×4mm的長方體片，每片含rhBMP-2400ug>bFGF60ng浸入制備好的單細胞懸液中，共同培養(yǎng)12小時。3試驗動物分組健康成年新西蘭大白兔8只，體重2.5?3.5kg,雌雄不限，按隨機化原則分為4組,CPC/BMP/bFGF/MSC組2只,CPC/BMP/bFGF2只,CPC/BMP/MSC組2只、空白對照組2

3、只，每只均為雙側(cè)植入。4植入動物兔耳緣靜脈麻醉。雙側(cè)上肢剪毛，碘酒消毒三遍，酒精脫碘，鋪無菌洞巾。嚴(yán)格無菌操作下行雙側(cè)前肢前臂縱切口,顯露雙側(cè)撓骨中段，于橈骨干中1/3處，切除梯骨干10mm(含骨膜)，造成撓骨干節(jié)段性骨缺損模型，大小為10mm×4mm×4mmo以等滲鹽水沖洗創(chuàng)口后,分別植入CPC/BMP/bFGF/MSC、CPC/BMP/bFGF、CPC/BMP/MSC等復(fù)合材料，空白對照組不植入任何材料，逐層縫合創(chuàng)口。術(shù)后分籠飼養(yǎng)，常規(guī)飲食，不加外固定，每只肌注青霉素40萬單位,1次/日,連續(xù)3d。5術(shù)后觀察5.1大體觀察術(shù)后觀察動物活動，刀口反應(yīng)

4、，缺損區(qū)有無新骨生成和炎癥反應(yīng)，骨痂生長情況，缺損區(qū)充填組織的完整性、質(zhì)地、程度和范圍等。5.2X線觀察分別于術(shù)后4、8、12周行動物雙側(cè)前肢X線正位片檢查，觀察植入組織與宿主骨界面的結(jié)合情況以及骨缺損的修復(fù)情況，各組進行對比。5.3組織學(xué)觀察于術(shù)后12周行空氣栓塞處死動物，取梯骨缺損處新生組織，置10%福爾馬林液中固定”硝酸脫鈣1周，石蠟包埋,切片,HE染色，光鏡觀察。5.4掃描電鏡觀察（SEM）于術(shù)后12周取梯骨缺損處骨組織，經(jīng)3%戊二醛固定,PBS液沖洗，丙酮梯度脫水、乙酸異戊酯置換，臨界點干燥，表面噴金后掃描電鏡觀察缺損區(qū)新骨生長情況以及生物活性玻璃材料降解情況。5.

5、5抗折強度測試術(shù)后12周吋，將兩側(cè)取出的植入材料在INSTRO134型萬能材料試驗機上作抗折強度測試’加載速度為015mmömin,iiZ錄測試數(shù)據(jù)以作比較’并進行統(tǒng)計學(xué)處理。6實驗結(jié)果6.1大體觀察術(shù)后12周吋I組機骨缺損區(qū)骨髓腔均再通，與鄰近正常骨色澤無差異;II、III組骨缺損初步修復(fù)，大部分骨髓腔再通，有少量連續(xù)性骨痂通過骨折斷端；空白對照組彎曲變形，形成假關(guān)節(jié)。6.2X線觀察術(shù)后12周I組骨缺損完全修復(fù)，其密度接近正常骨，可見皮質(zhì)骨及髓腔形成，皮質(zhì)骨厚度接近正常骨；II、III組骨缺損初步修復(fù),無明顯骨髓腔再通，有少量連續(xù)性骨痂通過斷端，骨質(zhì)疏松，II組較

6、明顯；IV組骨折斷端硬化分離,有少量反應(yīng)性骨痂，缺損區(qū)未出現(xiàn)橋接，且彎曲變形，形成假關(guān)節(jié)。6.3組織學(xué)觀察術(shù)后12周，I組見大量新生骨組織，骨小梁規(guī)則，連接成片，皮質(zhì)骨形成，骨髓腔再通，出現(xiàn)脂性骨髓，人工骨材料已大部分降解；II組、III組骨缺損區(qū)見有少量新生骨組織，有骨小梁形成，但不能連接、貫通，III組比II組新生骨組織稍多，骨小梁生成也較多；IV組缺損區(qū)，只在斷端間有少量新骨生成，周圍被纖維結(jié)締組織填充。6.4掃描電鏡觀察術(shù)后12周，I組骨缺損區(qū)見骨細胞基質(zhì)成熟,位于骨陷窩內(nèi)，核大，細胞器少。成骨細胞內(nèi)可見大量豐富擴張內(nèi)質(zhì)網(wǎng),蛋白合成吒盛，細胞器含量豐富，能量代謝吒盛。

7、骨基質(zhì)幼稚，功能活躍。在骨細胞間可見骨小梁斷面。人工骨材料已大部分降解。新生骨的表面形態(tài)已接近正常骨組織。II組、III組骨缺損區(qū)亦可見少量成骨細胞及骨小梁，骨基質(zhì)還不夠成熟，與正常密質(zhì)骨的形態(tài)仍有區(qū)別。IV組缺損區(qū)僅見少量新骨生成，新生骨與正常骨組織界線清晰。6.5TTCP側(cè)和CTCP側(cè)植入物術(shù)后12周吋抗折強度比較(MPa)術(shù)后12周吋;TTCP側(cè)和CTCP側(cè)植入物的平均抗折強度分別為18.22MPa和13.52MPa,前者的抗折強度明顯高于后者的抗折強度，統(tǒng)計學(xué)分析有顯著性差異。本實驗運用兔的骨髓