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《赤魟軟骨血管生成抑制因子的制備【畢業(yè)論文】》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、本科畢業(yè)論文（20屆）赤魟軟骨血管生成抑制因子的制備專(zhuān)業(yè)：藥學(xué)18目錄摘要3關(guān)鍵詞31前言52實(shí)驗(yàn)材料與儀器52.1原料52.2試劑62.3儀器63實(shí)驗(yàn)方法63.1分離提取赤魟總蛋白63.2紫外吸收法繪制蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線并測(cè)定蛋白質(zhì)含量[6]73.3抗氧化活性測(cè)定73.3.1清除DPPH自由基的能力測(cè)定（DPPH法）[7]73.3.2還原能力的測(cè)定（鐵氰化鉀還原法）[8]73.3.3清除羥自由基能力的測(cè)定（鄰二氮菲—Fe2+氧化法）[9-11]73.4離子交換層析[12]83.4.1celluloseED-52部分參
2、數(shù)83.4.2實(shí)驗(yàn)步驟83.4.3電泳實(shí)驗(yàn)[13]93.5凝膠過(guò)濾層析[14]103.5.1SephadexG-75的預(yù)處理103.5.2安裝層析柱103.5.3填裝103.5.4平衡103.5.5上樣113.5.6洗脫113.5.7收集113.5.8保存113.5.9電泳實(shí)驗(yàn)113.6DAFN抑制雞胚絨毛尿囊膜CAM血管生成的測(cè)定[15]114結(jié)果與分析114.1抗氧化活性測(cè)定114.1.160%硫酸銨提取物與100%硫酸銨提取物DPPH清除率的比較114.1.260%硫酸銨提取物與100%硫酸銨提取物羥自由基
3、清除能力的比較114.1.360%硫酸銨提取物與100%硫酸銨提取物還原力的比較124.2離子交換層析124.2.1紫外檢測(cè)124.2.2抗氧化能力124.2.3高效液相分析124.2.4電泳實(shí)驗(yàn)分析134.3凝膠過(guò)濾層析134.3.1紫外檢測(cè)數(shù)據(jù)134.3.2抗氧化能力144.3.3高效液相分析144.3.3電泳實(shí)驗(yàn)分析14184.4DAFN抑制雞胚絨毛尿囊膜CAM血管生成的測(cè)定155小結(jié)165.1硫酸銨分級(jí)沉淀165.2柱層析方法165.3抗氧化活性研究165.4新生血管生成抑制因子16參考文獻(xiàn)17致謝18附
4、錄Ⅰ英文翻譯19附錄Ⅱ英文原文2818赤魟軟骨血管生成抑制因子的制備[摘要]目的：從赤魟軟骨中分離純化出具有較強(qiáng)抗氧化活性的蛋白，并對(duì)其抑制新生血管的能力進(jìn)行比較分析。方法：將赤魟軟骨粉碎后離心，用(NH4)2SO4分級(jí)沉淀得粗蛋白，通過(guò)離子交換層析和凝膠層析進(jìn)行分離純化，電泳檢測(cè)蛋白分子量，用DPPH清除率、羥自由基清除率、還原力比較分段部位和單體的抗氧化蛋白活性，比較其對(duì)雞胚絨毛尿囊膜CAM血管生成的抑制程度。結(jié)果：經(jīng)過(guò)分離純化，得到了赤魟軟骨血管生成抑制因子（DASN），提取率為1009:1；12%的SDS
5、-PAGE電泳結(jié)果所示，考馬斯亮藍(lán)染色顯示為單一條帶，證明已達(dá)到電泳純，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的遷移率，測(cè)得其分子量為58.2kDa；運(yùn)用CAM活性抑制模型進(jìn)行藥理學(xué)研究分析發(fā)現(xiàn)，8μgDASN對(duì)新生血管的抑制率已經(jīng)高達(dá)82.7%，表明DASN能顯著抑制CAM膜新生血管生成，并且抑制效果具有一定的濃度依賴(lài)性；DPPH清除率、羥自由基清除率、還原力三種體外抗氧化實(shí)驗(yàn)顯示，DASN的清除率分別為84.41%、59.13%、0.262。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用多種現(xiàn)代分離技術(shù)從赤魟中分離得到的DASN具有顯著的血管生成抑制作用，是抗腫
6、瘤新藥研發(fā)的重要資源。[關(guān)鍵詞]赤魟；新生血管抑制因子；抗氧化18PreparationofneovascularizationinhibitorfactorfromDasyatisakajeiAbstract：Objective:TheangiogenesisinhibitorswasisolatedandpurifiedfromDasyatisakjei,anditsantioxidantactivitiesandangiogenesisinhibitingeffectwerealsoevaluated.Me
7、thods:ThecartilageofDasyatisakjeiwaschoppedandextracted.Thesupernatantwascollectedandcentrifuged.Thecrudeproteinwasfractionedthroughprecipitationwithammoniumsulfateandcentrifugation.Thesedimentswerecollected,dialyzeandlyophilized.Thefollowingpurificationwasdo
8、nebyDE-52Sepharoseion-exchangecolumnchromatography.ThefinalpurificationwasdonebySephadexG-75repeatedlyuntiltheelectrophoresispatternwasfoundonlyoneband.Theantioxidantactivitieswereevaluat
