GB7918.4-1987 化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 綠膿桿菌 - 下載地址.pdf

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1、中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)UDC668.58:576化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法.85.07綠膿桿菌GB7918.4一87StandardmethodsofmicrobiologicalexaminationforcosmeticsPseudomonpsaeruginosa綠膿桿菌在自然界分布甚廣，空氣、水、土壤中均有存在。對(duì)人有致病力，常引起人皮膚化膿感染，特別是燒傷、燙傷、眼部疾病患者被感染后，常使病情惡化，并可引起敗血癥，因此，在化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定不得檢出綠膿桿菌。1方法提要根據(jù)本菌生物學(xué)特征:革蘭氏陰性桿菌，氧化酶陽(yáng)性，能產(chǎn)生綠膿菌素。此外還能液化明膠，還原硝

2、酸鹽為亞硝酸鹽，在42℃條件下生長(zhǎng)等，可與類(lèi)似菌相區(qū)別。2培養(yǎng)墓和試劑2.1SCDLP液體培養(yǎng)基見(jiàn)GB7918.1-87《化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法總則》。2.2十六烷三甲基澳化餒培養(yǎng)基成分:牛肉膏3g蛋白陳log氯化鈉5g十六烷三甲基澳化按0.3g瓊脂20g蒸餾水1000m1制法:除瓊脂外，將上述成分混合加熱溶解，調(diào)PH為7.4-7.6，加入瓊脂，115'C(101b)20min滅菌后，制成平板備用。2.3乙酞胺培養(yǎng)基成分:乙酸胺10.Og氯化鈉5.0g無(wú)水磷酸氫二鉀1.39g無(wú)水磷酸二氫鉀0.73g硫酸鎂(MgSO,·7H,O)0.5g酚紅0.012g瓊脂20

3、g蒸餾水1000m1制法:除瓊脂和酚紅外，將其他成分加到蒸餾水中，加熱溶解，調(diào)PH為7.2，加入瓊脂、酚紅，121C中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部1987一05一28批準(zhǔn)1987一10一01實(shí)施.www.bzxzk.com.GH7918.4一87(15lb)20min高壓滅菌后，制成平板備用。2.4綠膿菌色素測(cè)定用培養(yǎng)基成分:蛋白陳20g抓化鎂1.4g硫酸鉀108瓊脂18g甘油(化學(xué)純)log燕餾水l000ml制法:將蛋白陳、抓化鎂和硫酸鉀加到蒸餾水中.加溫使溶解，調(diào)州至7.4.加入瓊脂和甘油，加熱溶解，分裝于試管內(nèi)，115'C(101b)20min高壓滅菌后，制成斜面?zhèn)?/p>

4、用。2.5明膠培養(yǎng)基成分:牛肉膏39蛋白陳5g明膠120g蒸餾水1000ml制法:取各成分加在燕餾水中浸泡20min,隨時(shí)攪拌加溫使溶解，調(diào)pH至7.4，分裝于試管內(nèi)，經(jīng)115'C(101b)20min滅菌后，直立制成高層備用。2.6硝酸鹽蛋白陳水培養(yǎng)基成分:蛋白陳log酵母浸青3呂硝酸鉀2g亞硝酸鈉0.5g燕餾水loooml制法:將蛋白陳和醉母浸膏加到蒸餾水中，加溫使溶解，調(diào)pH為7.2,煮沸過(guò)濾后補(bǔ)足液量，加入硝酸鉀和亞硝酸鈉，溶解混勻，分裝到加有小倒管的試管中，115'C(101b)20min滅菌后備用。2.了普通瓊脂斜面培養(yǎng)基成分:蛋白陳log牛肉青3g

5、抓化鈉5g瓊脂15g蒸餾水loooml制法:除瓊脂外，將其余成分溶解于燕餾水中，調(diào)叫為7.2-7.4，加入瓊脂，加熱溶解，分裝試管，121'C(151b)15min高壓滅菌后。制成斜面?zhèn)溆谩?儀器3.1培養(yǎng)箱:37'C.42C。3.2錐形燒瓶。3.3試管。5.4滅菌平皿3.5滅菌刻度吸管3.6顯微鏡。3.7載玻片。3.8接種針、接種環(huán)。144.www.bzxzk.com.GB7918.4一87電爐。:.{。高壓消毒鍋。4操作步吸4.1增菌培養(yǎng):取1:10樣品稀釋液lOml加到90mlSCDLP液體培養(yǎng)基中，置37℃培養(yǎng)18-24h,如有綠膿桿菌生長(zhǎng)，培養(yǎng)液表面多

6、有一層薄菌膜，培養(yǎng)液常呈黃綠色或藍(lán)綠色。注:如無(wú)SCDLP液體培養(yǎng)基時(shí)，可用普通肉湯培養(yǎng)基。植臉含防腐劑的化妝品時(shí)，在每1000.1普通肉湯中加1g卵磷脂,7g吐溫80,4.2分離培養(yǎng):從培養(yǎng)液的薄菌膜處挑取培養(yǎng)物，劃線接種在十六烷三甲基澳化按瓊脂平板上，置37℃培養(yǎng)18-24h。凡綠膿桿菌在此培養(yǎng)基上，其菌落扁平無(wú)定型，向周邊擴(kuò)散或略有蔓延，表面濕潤(rùn)，菌落呈灰白色，菌落周?chē)囵B(yǎng)基常擴(kuò)散有水溶性色素，此培養(yǎng)基選擇性強(qiáng)，大腸艾希氏菌不能生長(zhǎng)，革蘭氏陽(yáng)性菌生長(zhǎng)較差。在缺乏十六烷三甲基澳化按瓊脂時(shí)也可用乙酞胺培養(yǎng)基進(jìn)行分離，將菌液劃線接種于平皿中，放37℃培養(yǎng)24h，

7、綠膿桿菌在此培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，菌落扁平，邊緣不整，菌落周?chē)囵B(yǎng)基略帶粉紅色，其他菌不生長(zhǎng)4.3染色鏡檢:挑取可疑的菌落，涂片，革蘭氏染色，鏡檢為革蘭氏陰性者應(yīng)進(jìn)行氧化酶試驗(yàn)。4.4氧化酶試驗(yàn):取一小塊潔凈的白色濾紙片放在滅菌平皿內(nèi)，用無(wú)菌玻瑞棒挑取綠膿桿菌可疑菌落涂在濾紙片上，然后在其上滴加一滴新配制的1%二甲荃對(duì)笨二胺試液，在15-30s之內(nèi)，出現(xiàn)粉紅色或紫紅色時(shí)，為氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性，若培養(yǎng)物不變色，氧化酶試驗(yàn)陰性.4.5綠膿菌素試驗(yàn):取可疑菌落2-3個(gè)，分別接種在綠膿菌素測(cè)定用培養(yǎng)基上，置37'C培養(yǎng)24h，加入氯仿3-5ml，充分振蕩使培養(yǎng)物中的綠膿菌素溶解

8、于抓仿液內(nèi)，待抓仿提取液