海參皂苷的消化吸收特性的研究

《海參皂苷的消化吸收特性的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在教育資源-天天文庫。

1、海參皂苷的消化吸收特性的研究負責人：宋姍姍組員：王夢飛、朱詩怡、于鵬凱所在院系：食品科學與工程學院專業(yè)年級：食品科學與工程10級指導教師：王玉明實驗時間：2012年4月至2013年4月實驗目的研究海參皂苷的消化吸收特性，為深入研究海參皂苷的藥理活性機制及新型相關功能性保健食品研發(fā)提供支持。通過該實驗，熟悉了解一些基本的實驗技能和實驗儀器的使用。實驗支撐條件本實驗以食品科學與工程學院——人類健康實驗室為依托，該實驗室近年在海參加工和活性物質(zhì)研究方面具有豐富的經(jīng)驗和雄厚的前期基礎。人類健康實驗室具備本實驗所需以下儀器：動物實驗設備（飼養(yǎng)室、鋼絲籠），高效液相色譜-質(zhì)

2、譜（HPLC-MS/MS），基本的生化學試劑和有機溶劑。王玉明教授對海參的營養(yǎng)與活性、海參營養(yǎng)保持技術(shù)有深入的研究，具有較強的科研教學經(jīng)驗。實驗內(nèi)容1、海參粗皂苷的提取根據(jù)海參皂苷的化學性質(zhì)，利用乙醇浸提法提取海參干粉中總皂苷，并進一步經(jīng)過水飽和正丁醇萃取和大孔樹脂純化后得到總海參皂苷。2、海參皂苷溶液的配制將1800mg海參總皂苷溶解于36ml生理鹽水中，配成溶液，備用。實驗內(nèi)容3、動物實驗3.1高劑量皂苷單體EA灌胃大鼠實驗實驗組7組*5只對照組4組*3只對照組4組*3只每只注射1ml皂苷溶液，劑量為50mg/只每只注射1ml生理鹽水0、2、4、6、8、11

3、h時對實驗組的一組大鼠主動脈取全血處死0、2、8、11h對對照組的一只大鼠主動脈取全血處死另外，將實驗各組大鼠消化道完整分離，收集消化道內(nèi)容物，將8、11h實驗組及對照組的大鼠放入代謝籠，收集其糞便和尿液。實驗內(nèi)容3、動物實驗3.2低劑量皂苷單體EA灌胃大鼠實驗實驗組7組*3只每只注射1ml皂苷溶液，劑量為15mg/只0、0.5、1、2、3、4、7、9、11、24h時對實驗組的一組大鼠主動脈取全血處死另外，將實驗各組大鼠消化道完整分離，收集消化道內(nèi)容物，將8、12、24h實驗組及對照組的大鼠放入代謝籠，收集其糞便和尿液。實驗內(nèi)容4、血清皂苷單體EA液質(zhì)檢測方法的

4、確定4.1血清樣本的前處理（反相C18固相萃取柱萃取法）240μl血清加入360μl無水乙醇加入超純水10ml甲醇和10ml水活化固相萃取柱將樣品經(jīng)固相萃取小柱將乙醇濃度稀釋到10%1200r離心5min5ml水洗脫上清液混勻100μL色譜純甲醇溶解提取物40℃旋蒸至干收集甲醇洗脫液10ml甲醇洗脫進樣HPLC-MS/MS檢測分析實驗內(nèi)容4.1血清樣本的前處理（反相C18固相萃取柱萃取法）實驗內(nèi)容4.2實驗確定皂苷單體HPLC-MS/MS檢測分析條件液相色譜條件：ZorbaxSB-C18色譜柱（4.6mm×250mm,5μm）；流速：1.0mL/min；進樣量：

5、20μl；柱溫：30℃；流動相：A：乙腈，B：0.1%磷酸水溶液；梯度模式：時間梯度：0→5→30→35min濃度梯度：30%→30%→50%→30%溶劑A質(zhì)譜條件：電噴霧離子化，負離子模式檢測；進入質(zhì)譜流動相分流至0.5mL/min；細管電壓3.0kV；錐孔電壓35V；離子源溫度80℃；干燥氣溫度150℃；質(zhì)量掃描范圍m/z200～2000；霧化氣（N2）流速15L/h；干燥氣（N2）流速11.0L/h；EA單體MRM模式檢測m/z=591.4。實驗結(jié)果1、高劑量皂苷單體EA消化吸收曲線實驗初步確定高劑量及低劑量皂苷單體EA的消化吸收曲線，如下：實驗結(jié)果2、低

6、劑量皂苷單體EA消化吸收曲線實驗結(jié)果3、血清皂苷單體EA的液質(zhì)分析方法回收率檢驗取空白血清，加入一定濃度的標準品，使血清中EA的濃度分別為0.6μg/mL、10μg/mL、20μg/mL，用測定樣品的方法對標準品進行檢測，測定方法回收率為89.4%，95.7%，92.4%，證明該分析方法準確性良好。