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《CBLL1在非小細(xì)胞肺癌中高表達(dá)并促進(jìn)細(xì)胞的增殖和侵襲》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、分類(lèi)號(hào)：R734.2單位代碼：10159密級(jí)：公開(kāi)學(xué)號(hào)：201210051博士學(xué)位論文中文題目：CBLL1在非小細(xì)胞肺癌中高表達(dá)并促進(jìn)細(xì)胞的增殖和侵襲英文題目：CBLL1ishighlyexpressedinNon-SmallCellLungCancerandpromotescellproliferationandinvasion論文作者：惠林萍指導(dǎo)教師：邱雪杉教授學(xué)科專(zhuān)業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)完成時(shí)間：2018年11月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文CBLL1在非小細(xì)胞肺癌中高表達(dá)并促進(jìn)細(xì)胞的增殖和侵襲CBLL1ishighlyexp
2、ressedinNon-SmallCellLungCancerandpromotescellproliferationandinvasion論文作者惠林萍指導(dǎo)教師邱雪杉教授申請(qǐng)學(xué)位醫(yī)學(xué)博士培養(yǎng)單位基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院一級(jí)學(xué)科基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科病理學(xué)與病理生理學(xué)研究方向肺癌論文起止時(shí)間2013年9月—2018年11月論文完成時(shí)間2018年11月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)（遼寧）2018年11月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文摘要目的：CBLL1是最近被發(fā)現(xiàn)的一個(gè)E3泛素連接酶，它含有RING-finger結(jié)構(gòu)域。E-cadherin是典型的鈣粘蛋白成員，它的缺失
3、與癌的預(yù)后不良相關(guān)。CBLL1蛋白被確認(rèn)為結(jié)合酪氨酸磷酸化的E-cadherin，介導(dǎo)其內(nèi)化和隨后的泛素依賴(lài)的降解從而改變細(xì)胞間接觸。研究證明CBLL1在腫瘤發(fā)生中起多種作用。首先，CBLL1被報(bào)道可以誘導(dǎo)錨定-依賴(lài)的細(xì)胞生長(zhǎng)；此外，在人類(lèi)結(jié)腸癌組織中CBLL1在癌組織與正常組織相比表達(dá)明顯增加。其次，在CBLL1過(guò)表達(dá)的上皮細(xì)胞表達(dá)E-cadherinshRNA不促進(jìn)尖突起的形成，這表明CBLL1以E-cadherin非依賴(lài)的方式影響細(xì)胞的表型。CBLL1影響細(xì)胞對(duì)基質(zhì)的粘附和MDCK上皮細(xì)胞的侵襲能力。在結(jié)直腸上皮細(xì)胞中，
4、自分泌的Slit-Robo通路促進(jìn)CBLL1介導(dǎo)的E-cadherin下調(diào)促進(jìn)癌的發(fā)生。這些研究表明CBLL1可能是腫瘤進(jìn)展中重要信號(hào)通路的下游蛋白，目前需要更多的研究來(lái)闡明CBLL1作為一個(gè)潛在的治療靶點(diǎn)的作用。此外，CBLL1可以增加RNA結(jié)合蛋白PSF與癌癥相關(guān)的蛋白質(zhì)正常編碼的mRNA結(jié)合的能力，并且促進(jìn)MDCK細(xì)胞增殖。而在ERα依賴(lài)的乳腺癌MCF-7細(xì)胞中，CBLL1過(guò)表達(dá)可抑制雌激素依賴(lài)的細(xì)胞增殖和遷移。此外，東莉潔等研究發(fā)現(xiàn)CBLL1可以抑制HIF-1α/VEGF通路活性?？傊珻BLL1在腫瘤形成中的潛在作用
5、還需要進(jìn)一步的研究?；谏鲜隼碛晌覀兺茰y(cè)，CBLL1與癌癥的進(jìn)展有著密切的關(guān)系。為了驗(yàn)證我們的推測(cè)，探討CBLL1對(duì)非小細(xì)胞肺癌的生物學(xué)作用，我們采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)CBLL1在非小細(xì)胞肺癌和癌旁肺組織中的表達(dá)，并結(jié)合臨床資料分析其與臨床病理特征之間的關(guān)系，上調(diào)和干擾CBLL1后對(duì)肺癌細(xì)胞增殖、侵襲的影響，探討其可能的分子機(jī)制，為肺癌的早期診斷和治療提供新的靶點(diǎn)。研究方法：1.肺癌組織標(biāo)本本研究選取了中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院2009年1月到2013年12月的79例肺癌組織和24例癌旁肺組織石蠟標(biāo)本，均來(lái)自肺癌外科手術(shù)切除的
6、患者，所有患者在手術(shù)前未接受放療或者化療。2.免疫組織化學(xué)染色、結(jié)果判定組織切片經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度酒精脫苯、水化后，采用鏈霉素抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶法檢測(cè)CBLL1蛋白表達(dá)。I中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文3.細(xì)胞培養(yǎng)人支氣管上皮細(xì)胞HBE、肺腺癌細(xì)胞A549、H1299、SPC-A-1、H157。4.siRNA干擾和細(xì)胞轉(zhuǎn)染根據(jù)siRNA設(shè)計(jì)原則，選取人CBLL1mRNA中的特異性核苷酸片段為靶目標(biāo)，由上海吉瑪基因化學(xué)技術(shù)有限公司合成。分為非特異性siRNA轉(zhuǎn)染組和特異性siRNA轉(zhuǎn)染組，每個(gè)實(shí)驗(yàn)均重復(fù)三次，轉(zhuǎn)染具體步驟按Lip
7、ofectamine3000試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。CBLL1表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-HA-CBLL1由YasuyukiFujita教授惠贈(zèng)。具體轉(zhuǎn)染步驟按脂質(zhì)體Lipofectamine3000試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，以轉(zhuǎn)染空載體細(xì)胞作為對(duì)照。5.RealtimeRT-PCR用RNAIsoPlus提取細(xì)胞的總RNA后，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)，在ABI7900儀器上進(jìn)行PCR反應(yīng)。6.Westernblot10%SDS-聚丙烯酰胺瓊脂糖凝膠電泳，濃縮膠電壓80伏特，分離膠電壓120福特。恒壓50伏轉(zhuǎn)印120分鐘。轉(zhuǎn)膜結(jié)束后，進(jìn)行封閉，一抗4℃孵育過(guò)
8、夜，TTBS洗膜3次，每次10分鐘，二抗室溫孵育2小時(shí)，TTBS洗膜3次，每次10分鐘。最后ECL發(fā)光。7.免疫熒光染色細(xì)胞爬片以后，4％多聚甲醛室溫固定20min，PBS漂洗3次。染色步驟如下：5％BSA封閉2個(gè)小時(shí)，滴加一抗4℃孵育過(guò)夜，滴加FITC或TRITC標(biāo)記山羊抗
