hepcidin在非小細胞肺癌中的表達及其促進肺癌細胞增殖生長的研究

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1、萬方數(shù)據(jù)中圖分類號R734．2UDC亙地博士學(xué)位論文學(xué)校代碼密級10533llepcidin在非小細胞肺癌中的表達及其促進肺癌細胞增殖生長的研究TheinvestigationforHepcidinexpressioninnon．．smallcelllungcancerandpromotinggrowthoflungcancercell作者姓名：陳倩學(xué)科專業(yè)：臨床醫(yī)學(xué)研究方向：外科學(xué)(胸心外科)學(xué)院(系、所)：湘雅二醫(yī)院指導(dǎo)教師：喻風(fēng)雷教授答辯委員會主席中南大學(xué)二O一三年五月。．待豳七’萬方數(shù)據(jù)博士學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明l

2、AllIIII11[IIIl[IIllllflUFIIIIJ

3、Y2688203本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中南大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻均已在論文中作了明確的說明。作者簽名：輔吼絲年』月三日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并根據(jù)國家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存學(xué)位論文。同時授權(quán)

4、中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到《中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。?名：馳聊簽名煎期：生年』月當(dāng)萬方數(shù)據(jù)摘要Hepeidin在非小細胞肺癌中的表達及其促進肺癌細胞增殖生長的研究摘要：目的：肺癌是世界上最常見的癌癥，每年新發(fā)病例接近120萬，同時也是男性癌癥死亡的主要原因。而在女性中，肺癌是第四常見的癌癥，也是癌癥死亡中排名第二的主要原因．根據(jù)組織學(xué)形態(tài)分類，肺癌可以被分為非小細胞肺癌(NSCLC)和小細胞肺癌兩種類型，而非小細胞肺癌在原發(fā)肺癌中所占比例超過85％。鐵是所有生命細胞基本活動所必需的。很多動物模型和流行病學(xué)調(diào)查表明，過量的鐵是促進惡

5、性腫瘤產(chǎn)生的重要原因之一。研究發(fā)現(xiàn)，機體內(nèi)鐵代謝的調(diào)控跟Hepcidin關(guān)系十分密切。Hepcidin是一種主要由肝臟合成分泌的小分子多肽，在心臟、腦、肺、胰腺等其他組織器官中也有一定的表達。人類Hepcidin由HAMP基因轉(zhuǎn)錄并翻譯。Hepcidin主要是通過與細胞表面控制鐵釋放的膜鐵轉(zhuǎn)運蛋白Ferroportin的結(jié)合，使其被內(nèi)陷入細胞質(zhì)中被溶酶體吞噬降解，從而抑制細胞內(nèi)鐵的輸出。近來對于Hepcidin在腫瘤中的關(guān)系和作用越來越受重視，研究顯示Hepcidin在肝細胞癌和腎細胞癌中的表達是下調(diào)的，但在結(jié)腸癌和乳腺癌中表達卻升高。目前尚無相關(guān)研究報道Hepcidin與肺癌的

6、關(guān)系，因此本課題著重于研究Hepcidin．25在NSCLC患者血液循環(huán)中的表達情況，分析Hepcidin和其相關(guān)信號通路因子IL．6及BMP在NSCLC患者中的關(guān)系；檢測Hepcidin在肺癌組織標(biāo)本中的表達水平，分析其與病理學(xué)特征的關(guān)系；進一步通過細胞生物學(xué)實驗分析Hepcidin與肺癌細胞生長情況的關(guān)系，并且研究并初步闡明Hepcidin在肺癌細胞增殖生長過程中的作用機制。方法：采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)分別檢測53例NSCLC患者和16例健康志愿者的血清Hepcidin．25、IL一6和BMP2的含量水平，分析與肺癌病理學(xué)特征之間的關(guān)系以及相互之間的關(guān)系。通過實時熒光定

7、量PCR檢測65例NSCLC患者的肺癌組織樣本和正常肺組織樣本中的HepcidinmRNA表達水平；同時用免疫組織化學(xué)法檢測65例NSCLC組織標(biāo)本和57例正常肺組織標(biāo)本中Hepcidin的定位及表達情況。進一步測定了6種NSCLC細胞株和支氣管上皮細胞株HBE中HepcidinmRNA的表達水平，選擇表達合適的H520細胞株通過細胞免疫熒光觀察Hepcidin在細胞內(nèi)的表達情況；構(gòu)建Hepcidin真核表lI萬方數(shù)據(jù)博士學(xué)位論文摘要達載體使Hepcidin在HBE細胞內(nèi)過表達，運用WST．8試驗和細胞平板克隆形成試驗研究Hepcidin表達水平升高對細胞增殖生長的影響；同時用R

8、NA干擾技術(shù)降低H520細胞內(nèi)Hepcidin的表達，運用WST．8試驗和細胞平板克隆形成試驗研究Hepcidin表達水平下降對細胞增殖生長的影響；通過WST．8試驗檢測人工合成Hepcidin結(jié)合域(皿D)對H520細胞的影響，分析HBD在肺癌細胞生長過程中的作用。此外還應(yīng)用熒光測量法檢測Hepcidin過表達的HBE細胞和Hepcidin表達下降的H520細胞內(nèi)的可變鐵池(LIP)的變化，進一步闡明Hepcidin促進肺癌細胞增殖生長的機制。結(jié)果：NSCLC患者的血清Hepc