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1、一、制備膠體金的準備（一）玻璃器皿的清潔制備膠體金的成功與失敗除試劑因素以外玻璃器皿清潔是非常關鍵的一步。如果玻璃器皿內不干凈或者有灰塵落入就會干擾膠體金顆粒的生成，形成的顆粒大小不一，顏色微紅、無色或混濁不透明。我們的經驗是制備膠體金的所有玻璃器皿先用自來水把玻璃器皿上的灰塵流水沖洗干凈，加入清潔液（重鉻酸鉀1000g,加入濃硫酸2500ml，加蒸餾水至10000ml）浸泡24h，自來水洗凈清潔液，然后每個玻璃器皿用洗潔劑洗3～4次，自來水沖洗掉洗潔劑，用蒸餾水洗3～4次，再用雙蒸水把每個器皿洗3～4次，烤箱干燥后備用。通過此方法的處理玻璃器皿不需要硅化處理，而直接
2、制備膠體金。也可用已經制備的膠體金溶液，用同等大不顆粒的金溶液去包被所用的玻璃器皿的表面，然后棄去，再用雙蒸水洗凈，即可使用，這樣效果更好，因為減少了金顆粒的吸附作用。（二）試劑的配制要求按照Frens法還可以制備出其它不同顆粒大小的膠體金出來。許多研究證明用該法制備膠體金時金顆粒的大小是檸檬酸三鈉用量的函數(shù)，基本的規(guī)律是檸檬酸三鈉用量多，膠體金顆粒直徑小，檸檬酸三鈉用量越少，腔體金顆粒直徑越大。（1）所有配制試劑的容器均按以上要求酸處理洗凈，配制試劑用雙蒸餾水或三蒸餾水。（2）氯化金（HauCl4水溶液的配制：將lg的氯化金一次溶解于雙蒸水中配成1%的水溶液。放在4
3、”c冰箱內保存長達幾個月至1年左右，仍保持穩(wěn)定。（3）白磷或黃磷乙醚溶液的配制：白磷在空氣中易燃燒，要格外小心操作。把白磷在雙蒸水中切成小塊，放在濾紙上吸于水份后，迅速放入已準備好的乙醚中去，輕輕搖動，等完全溶解后即得飽和溶液。儲藏于棕色密閉瓶內，放在陰涼處保存。檸檬酸三鈉還原法（Frens1973）此方法是由Frens在1973年創(chuàng)立的，制備程序很簡單，膠體金的顆粒大小較一致，廣為采用。該法一般先將0.01%的HAuCl4溶液加熱至沸騰，迅速加入一定量1%檸檬酸三鈉水溶液，開始有些藍色，然后淺藍、藍色，再加熱出現(xiàn)紅色，煮沸7～10min出現(xiàn)透明的橙紅色。各種顆粒的膠
4、體金制備詳見表5-2。表5-2檸檬酸三鈉用量與膠體金顆粒直徑的關系0.01%的HAuCl4（ml）1%檸檬酸三鈉(ml)直徑（ml）1005.010.01004.015.01001.525.01001.050.01000.7560.01000.6070.01000.4298.01000.32147.01000.25160溶液內加入一定量的還原劑使金離子變成金原子。目前常用的還原劑有：白磷、乙醇、過氧化氫、硼氫化鈉、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等，下面分別介紹制備不同大小顆粒的膠體金溶液。二、制備膠體金的方法和步驟窄長型膜,依靈敏度及流速的要求,選用孔徑不同的合適的膜.自下
5、端至上端(由左至右)由:1.樣品墊(samplepad)1.載有固相標記配體(抗體或抗原)的玻璃纖維素膜條或聚酯膜條(conjugatereleasemembrane)2.合適孔徑的硝酸纖維素膜條(噴涂有顯示陽性結果的捕捉分析物的配體線,和陰性對照組線)(ni-trocellulosememtrane)3.吸水墊(absorbentpad)等四部分銜接固定在不干擾免疫反應和流速的簿塑料背板上(backsheet)膠體金快速斑點結合免疫分析???隨著免疫分析日益廣泛應用于以臨床為主以及非臨床領域的診斷工業(yè)（diagnosticindustry），免疫分析向兩個方向發(fā)展：
6、一類為全自動化的免疫分析；另一類為以硝酸纖維膜為載體的快速免疫分析。前者需要價格昂貴的全自動儀器及與儀器嚴格配套的各種試劑盒，目前只能在醫(yī)療及檢測中心應用，雖也能較快速給出結果，但仍需一定時間，不適合遠離醫(yī)療及檢測中心的地區(qū)，更不能用于“患者床旁檢驗”（realtimeclinicaldecision）和普查的需要，在酶免疫分析的基礎上，主要以硝酸纖維素膜為載體的快速診斷方法迅速和廣泛地發(fā)展起來。這類方法目前在文獻及市場上的命名還很不統(tǒng)一。它實際上屬于快速斑點免疫結合分析（dotimmunobindingassay,DIBA）,始于80年代?，F(xiàn)介紹如下：1?兩種模式1
7、.1?班點免疫滲濾分析（dotimmunofiltrtionassay,DIFA）?免疫反應是通過垂直穿透固定有配體的硝酸纖維素膜而進行的（flowthroughtype）。1.2?斑點免疫層析分析（dotimmunochro-matographyassay,DICA）?分析原理與DIFA相同，只是反應液體的流動不是直向的穿透流動，而是層析作用的橫向流動（lateralflowtype）,在1990年開始應用。???兩種類型快速免疫分析比較見表。表?免疫滲濾分析和免疫層析分析的比較?免疫滲濾分析（穿透濾過型）免疫層析分析（橫向流動型）硝酸纖維素膜的種
