膠體金的制備.doc

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1、膠體金的制備膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，形成帶負(fù)電的疏水膠溶液，由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱膠體金。1.煮金用容量瓶量取200ml超純水加入到500ml錐形瓶中，將錐形瓶置于磁力加熱攪拌器加熱板上，放入磁力攪拌子，打開攪拌旋鈕至適當(dāng)速度。用移液器吸取2ml1%氯金酸溶液于上述200ml超純水中，攪拌1min，關(guān)閉攪拌旋鈕，打開加熱旋鈕，加熱至沸騰。打開攪拌旋鈕至適當(dāng)速度，快速

2、加入經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾。1%檸檬酸三鈉溶液3.6ml，溶液在2分鐘內(nèi)由灰色變黑色最后變?yōu)榧t色，再繼續(xù)加熱攪拌10分鐘。關(guān)掉加熱旋鈕，適當(dāng)速度攪拌至室溫，定容至200ml，4~C保存。由于金顆粒的直徑和制備時(shí)加入檸檬酸三鈉的量是密切相關(guān)的，保持其他條件不變，僅僅改變檸檬酸三鈉的量，可以制備出不同顏色的金溶膠，也就是不同顆粒的金溶膠，100mL氯金酸中檸檬酸三鈉的量對(duì)金顆粒影響如下表0.01%氯金酸（mL）1%檸檬酸三鈉（mL）金顆粒直徑（nm）1005.010.01004.015.01001.525.010

3、01.050.01000.7560.01000.6070.01000.4298.01000.32147.01000.25160注：玻璃器皿必須徹底清洗，最好是經(jīng)過(guò)硅化處理的玻璃器皿，或第一次配置膠體金穩(wěn)定的玻璃器皿，再用雙蒸水沖洗再用，否則影響金顆粒的穩(wěn)定性，不能獲得預(yù)期大小的金顆粒（硅化過(guò)程：將玻璃容器浸泡于5%二氯二甲硅烷的氯仿溶液中1min，室溫干燥后，蒸餾水沖洗再干燥備用。）1.試劑必須保證嚴(yán)格的純凈，所有試劑必須用雙蒸水或三蒸水并去離子后使用，并且使用前微孔過(guò)濾膜過(guò)濾，以除去可能混有的雜質(zhì)。

4、2.配置膠體金溶液的PH以中性（ph7.2）較好，實(shí)驗(yàn)室塵粒要盡量減少，否則缺乏重復(fù)性。3.氯金酸極易吸潮，對(duì)金屬有強(qiáng)烈的腐蝕性，不能使用金屬鑰匙，避免接觸天平秤盤，由于氯金酸極易吸潮，配置時(shí)最好將一小包一次性溶解。4.金顆粒容易吸附在電極使之堵塞，故不能使用PH電極測(cè)定金溶液的PH值。影響金顆粒大小的因素1，如果有較多大小不等的金顆粒及有橢圓形、多角形存在時(shí)應(yīng)重新制備。一般造成這種情況的主要原因：加還原劑時(shí)不是一次迅速加入，而是分多次加入，攪拌不均勻，或者速度太慢沒(méi)有攪拌起來(lái)。制備量的多少、容器的大

5、小、加熱時(shí)間也會(huì)影響膠體金顆粒的大小膠體金原理：膠體金免疫層析法將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標(biāo)記試劑（抗體或單克隆抗體）吸附在結(jié)合墊上，當(dāng)待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后，通過(guò)毛細(xì)作用向前移動(dòng)，溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng)，當(dāng)移動(dòng)至固定的抗原或抗體的區(qū)域時(shí)，待檢物與金標(biāo)試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，聚集在檢測(cè)帶上，可通過(guò)肉眼觀察到顯色結(jié)果。該法現(xiàn)已發(fā)展成為診斷試紙條，使用十分方便。