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《鮸魚微衛(wèi)星標(biāo)記的開發(fā)及篩選【畢業(yè)論文】》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、目錄本科畢業(yè)論文（20屆）鮸魚微衛(wèi)星標(biāo)記的開發(fā)及篩選專業(yè)：生物科學(xué)目錄目錄摘要IAbstractII引言1材料與方法31.1材料31.1.1儀器與設(shè)備31.1.2儀藥品與試劑41.2實(shí)驗(yàn)方法51.2.1鮸魚基因組DNA的提取51.2.2酶切51.2.3接頭的制備與連接51.2.4鮸魚基因組文庫(kù)的建立61.2.5探針雜交和磁珠富集61.2.6富含微衛(wèi)星序列的PCR產(chǎn)物及測(cè)序61.2.7微衛(wèi)星PCR引物和電泳71.2.8聚丙烯酰胺凝膠銀染8結(jié)果與分析92.1DNA提取結(jié)果92.2酶切及適宜基因組片段的獲得102.3菌落PCR檢測(cè)重組率112.4測(cè)序結(jié)果及其序列分析13討論153.1測(cè)序結(jié)果及序
2、列分析153.2目標(biāo)產(chǎn)物顯色法的選取163.3PCR引物的優(yōu)點(diǎn)17小結(jié)18參考文獻(xiàn)19致謝21中文摘要摘要[摘要]為了初步研究鮸魚（Miichthysmiiuy）的群體遺傳結(jié)構(gòu)，本實(shí)驗(yàn)采用富集文庫(kù)法構(gòu)建了鮸魚的部分基因組文庫(kù)，將鮸魚基因組的DNA用MseⅠ酶酶切，回收后進(jìn)行純化，提取到300bp-1000bp左右大小的DNA片段，用生物素標(biāo)記的簡(jiǎn)單重復(fù)序列作探針與其進(jìn)行雜交，將雜交的復(fù)合產(chǎn)物結(jié)合到有鏈霉親和素包被的磁珠上，經(jīng)過(guò)一系列的洗滌程序，去除磁珠表面未含有微衛(wèi)星的片段。然后，將吸附在磁珠上的片段洗脫，利用PCR儀擴(kuò)增放大所得的有效片段，再進(jìn)行克隆和測(cè)序，根據(jù)各個(gè)微衛(wèi)星兩端的保守序列設(shè)
3、計(jì)引物，就可以得到微衛(wèi)星分子標(biāo)記。根據(jù)自行分離得到的序列設(shè)計(jì)了44對(duì)引物，對(duì)舟山地區(qū)的鮸魚進(jìn)行群體遺傳多樣性分析，其中12對(duì)引物擴(kuò)增出了清晰條帶，即多態(tài)性高的目的片段。鮸魚微衛(wèi)星標(biāo)記的開發(fā)和篩選等的研究工作可以為鮸魚遺傳種質(zhì)資源分析及遺傳進(jìn)化的研究提供更加詳細(xì)和深入的信息，在一定程度上還可以有效促進(jìn)鮸魚資源保護(hù)和鮸魚人工養(yǎng)殖的可持續(xù)發(fā)展。[關(guān)鍵詞]微衛(wèi)星；鮸魚；種群多樣性；多態(tài)性；分子標(biāo)記19Abstract[Abstract]PartialgenomiclibrarywasconstructedinordertostudythegeneticstructureofMiichthysmii
4、uy.Inthisexperiment,weisolatedmicrosatelliteDNAfromMiichthysmiiuygenomewiththismethod.MiichthysmiiuygenomicDNAwasextractedanddigestedwithrestrictionenzymeMseI.Fragmentsover300bpwereisolatedandpurifiedandthenligatedwithshortlinkers.ThisgenomicDNAwashybridizedwithabiotin-labeledmicrosatelliteprobe(C
5、A)13.Thehybridmixturewasincubatedwithmagneticbeadscoatedwithstreptavidin.Afterwashingtoremovethenon-SSRfragments,theelutedsingle-strandedDNAcontainstheselectedmicrosatelliteDNA.Fromtheprimersdesignedforthe44microsatelliteloci,12couldamplifyexpectedPCRproducts.Thedevelopingandscreeningofmicrosatell
6、itesinMiichthysmiiuywillprovidemoreinformationfortheresearchofhereditysourceanalysisandheredityevolution,alsobenefitsthefuturedevelopmentofMiichthysmiiuyprotectionandMiichthysmiiuyartificialbreedingtosomeextent.[Keywords]Microsatellite;Miichthysmiiuy;Populationdiversity;Polymorph;Molecularmarkers.
7、19引言鮸魚（Miichthysmiiuy）屬鱸形目（Perciformes）、石首魚科（Sciaenidae）、鮸魚屬（Miichthys），為近海溫水性底層魚類，喜好棲息于多低質(zhì)泥沙或者泥的海底[1]，在我國(guó)沿海均有分布，但以東、黃海較多。其肉味鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，深受國(guó)內(nèi)外消費(fèi)者的喜愛，尤其鰾俗稱“魚肚”，為高級(jí)滋補(bǔ)品，具有較高的食用和藥用價(jià)值[2]。鮸魚在我國(guó)主要產(chǎn)于沿海，不過(guò)在朝鮮、韓國(guó)和日本均有分布，作為我國(guó)的名
