羅漢果醇（苷元）的代謝及其代謝產(chǎn)物的分布研究

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1、c分類號(hào)：R285學(xué)號(hào)：111018密級(jí)：公開學(xué)位類型：學(xué)術(shù)學(xué)位?碩士學(xué)位論文羅漢果醇（苷元）的代謝及其代謝產(chǎn)物的分布研究研究生：陳兵導(dǎo)師：李典鵬研究員所屬學(xué)院：藥學(xué)院專業(yè)：藥物化學(xué)研究方向：天然藥物化學(xué)成分研究完成日期：2014年05月20日廣西﹒南寧?基金項(xiàng)目：2011年度國(guó)家自然科學(xué)基金（資助號(hào)：81160392、81160518）原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：本人所呈交的學(xué)位論文，是在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。學(xué)位論文中凡引用他人已經(jīng)發(fā)表或未發(fā)表的成果、數(shù)據(jù)、觀點(diǎn)等，均已明確注明出處。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或

2、撰寫過(guò)的科研成果。對(duì)本文的研究成果做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。論文作者簽名：日期：關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解廣西中醫(yī)藥大學(xué)有關(guān)保留使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)廣西中醫(yī)藥大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。（保密論文在解密后遵守此規(guī)定）論文作者簽名：導(dǎo)師簽名：日期：日期：羅漢果醇（苷元）的代謝及其代謝產(chǎn)物的分布研究中文摘要目的：本課題擬通過(guò)從羅漢

3、果皂苷V（50%）水解產(chǎn)物中分離得到足量的羅漢果醇（苷元）單體（純度≥98%），進(jìn)而建立羅漢果醇在體外及SD雄性大鼠體內(nèi)的代謝模型及方法，最終借助高壓液相與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分離鑒定其代謝產(chǎn)物，并探析羅漢果醇體內(nèi)外的代謝途徑和裂解規(guī)律，從而闡明羅漢果醇在體內(nèi)外代謝的特點(diǎn)與規(guī)律，為羅漢果的進(jìn)一步開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。方法：（1）羅漢果醇（苷元）的制備：采用5%H2SO4甲醇溶液水解50%羅漢果皂苷V，水解液經(jīng)氯仿萃取旋干得到粗提物，結(jié)合硅膠柱色譜及制備液相色譜等分離技術(shù)制備得純度達(dá)98%的羅漢果醇（苷元）單體。（2）羅漢果醇（苷元）體外代謝實(shí)驗(yàn)研究：①、運(yùn)用SD雄性大鼠肝

4、S9體外孵化結(jié)合液質(zhì)聯(lián)用的方法研究羅漢果醇在肝臟中的代謝成分。②、羅漢果醇置于含有人的腸內(nèi)菌群的培養(yǎng)基中，37℃厭氧條件下培養(yǎng)48h，用甲醇超聲提取，應(yīng)用高壓液相與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)分析其代謝成分。③、應(yīng)用人肝癌細(xì)胞（HepG2）進(jìn)行轉(zhuǎn)化，并用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)其代謝成分。④、將單體羅漢果醇置于人工胃液中，37℃恒溫水浴下水解，考察羅漢果醇在0h、1h、2h、3h、4h這5個(gè)時(shí)間點(diǎn)的穩(wěn)定性，從而了解羅漢果醇口服后在胃液中的水解成分。（3）羅漢果醇（苷元）體內(nèi)代謝實(shí)驗(yàn)及其代謝產(chǎn)物的分布研究：按100mg/kg劑量將羅漢果醇單體灌胃SD雄性大鼠，收集給藥前后大鼠的糞便

5、、尿液、血液和心、肝、脾、肺、腎、腸、胃組織作為生物樣品，將各生物樣品進(jìn)行純化后，n采用HPLC-ESI-IT-TOF-MS技術(shù)檢測(cè)其體內(nèi)代謝成分，利用島津液質(zhì)數(shù)據(jù)分析工作站對(duì)代謝產(chǎn)物進(jìn)行推導(dǎo)和分析。（4）羅漢果醇（苷元）體內(nèi)代謝產(chǎn)物的分離及鑒定：采用高分辯質(zhì)譜，一維和二維核磁共振波譜技術(shù)鑒定單體成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)。結(jié)果：（1）從50%羅漢果皂苷V水解液中分離并得到羅漢果醇（苷元）。通過(guò)利穗低中壓制備色譜，島津制備液相色譜制備得到5g羅漢果醇單體（純度≥98%）。（2）羅漢果醇體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明：羅漢果醇在人工胃液和人的腸道菌群培養(yǎng)液以及HepG2細(xì)胞中均有部分代謝

6、，代謝產(chǎn)物主要是羅漢果醇的氧化產(chǎn)物，此次共發(fā)現(xiàn)體外代謝產(chǎn)物4個(gè)。但本實(shí)驗(yàn)中羅漢果醇在大鼠肝S9體外孵化體系中代謝并不像體內(nèi)一樣明顯，可能的原因有酶的活性、酶量、孵化的時(shí)間、孵化的體系、以及與體內(nèi)不一樣的復(fù)雜體系等，因此還需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)。（3）通過(guò)羅漢果醇的體內(nèi)代謝實(shí)驗(yàn)，從體內(nèi)各生物樣品中發(fā)現(xiàn)了羅漢果醇的代謝產(chǎn)物60個(gè)，其轉(zhuǎn)化途徑主要是發(fā)生了羥基化和脫氫反應(yīng)，增加1-4個(gè)羥基，脫去2和或者4個(gè)氫，其中還有兩個(gè)增加了一個(gè)甲氧基。其中糞便中發(fā)現(xiàn)代謝產(chǎn)物60個(gè)，尿液中29個(gè)，血漿中11個(gè)，組織中44個(gè)（心：3個(gè)、肝：23個(gè)、脾：0個(gè)、肺：3個(gè)、腎：5個(gè)、腸：28個(gè)、

7、胃：19個(gè)），在尿液、血漿及組織中發(fā)現(xiàn)的代謝產(chǎn)物均能在糞便找到。（4）采用柱色譜及高壓液相制備方法從灌胃給藥大鼠糞便中共分離得到12個(gè)單體代謝產(chǎn)物，采用高分辯質(zhì)譜，一維和二維核磁共振波譜技術(shù)鑒定了4個(gè)化合物結(jié)構(gòu)，且均為新的化合物。在體內(nèi)各生物樣品中仍可檢測(cè)到原形羅漢果醇的存在，在血液中可以檢測(cè)到羅漢果醇的氧化成分，推測(cè)其可能為吸收入血液的有效成分。從代謝產(chǎn)物來(lái)看，羅漢果醇在大鼠體內(nèi)主要發(fā)生羥基化反應(yīng)。結(jié)論：通過(guò)對(duì)羅漢果醇單體在大鼠體內(nèi)、體外吸收與代謝成分分析，并分離鑒定了羅漢果醇在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物，掌握了羅漢果醇的體內(nèi)外的代謝途徑、特點(diǎn)及規(guī)律，為羅漢果的應(yīng)用和開

8、發(fā)提供了科學(xué)依據(jù)。關(guān)鍵詞：羅漢果醇，代