發(fā)酵過程及優(yōu)化實驗產(chǎn)淀粉酶細菌的優(yōu)化實驗

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1、發(fā)酵過程及優(yōu)化實驗產(chǎn)淀粉酶細菌的優(yōu)化實驗姓名：學號：班級:一、實驗?zāi)康蘑倩仡櫯渲婆囵B(yǎng)基的原理及配制的一般方法、操作步驟②了解鑒別培養(yǎng)基的原理，并掌握配制鑒別培養(yǎng)基的方法和步驟③了解分批培養(yǎng)時微牛物牛長曲線形成的原理及各時期的主要特點④學習微生物生長曲線和產(chǎn)物形成曲線的測定方法⑤掌握分光光度法測定液化型淀粉酶活力的基本原理和方法⑥了解發(fā)酵條件對產(chǎn)物形成的影響，用單因子試驗找出實驗菌株的最佳培養(yǎng)條件二、實驗原理對于淀粉酶產(chǎn)生菌的篩選，用的是在含有淀粉的培養(yǎng)基中培養(yǎng)微生物，滴加碘液進行染色，若出現(xiàn)透明圈，則表明該菌能產(chǎn)生

2、胞外淀粉酶。將少量微生物接種到一定體積的新鮮培養(yǎng)基中，在適宜條件下培養(yǎng)，定時測定培養(yǎng)液中微牛物的牛長量，以牛長量為縱坐標，培養(yǎng)時間為橫坐標繪制的曲線就是生長曲線。依據(jù)生長速率的不同，一般把生長曲線分為延滯期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個階段。本實驗用比濁法來測定。淀粉遇碘呈藍色，這種淀粉■碘復合物在660nm處有較大的吸收峰，可用分光光度計測定。隨著酶的不斷作用，淀粉長鏈被切斷，生成小分子糊精，使其對碘的藍色反應(yīng)逐漸消失，因此可以根據(jù)一定時間內(nèi)藍色消失的程度為指標來測定Q■淀粉酶的活力。最后，在相同碳含量的條件下，配

3、制不同碳源的培養(yǎng)基，測試產(chǎn)淀粉菌對不同碳源的利用情況。三、材料與器材1.菌種枯草芽砲桿菌2.培養(yǎng)基普通培養(yǎng)基:牛肉膏3g,蛋白腺10g,NaCl5g,自來水lOOOmL,pH7?2~7?4。鑒別型培養(yǎng)基：牛肉膏3g,蛋白腺10g,可溶性淀粉10g,NaCl5g,瓊脂20自來水lOOOmL,pH7.2?7.4。不同碳源的培養(yǎng)基：①葡萄糖：牛肉膏3g,蛋口腺10g,葡萄糖2g,NaCl5g,自來水100ml,pH7.2~7.4②可溶性淀粉：牛肉膏3g,蛋白腺10g,可溶性淀粉1.818g,NaCI5g,自來水100ml

4、,pH7.2?7.4③果糖：牛肉膏3g,蛋白月東10g,果糖2g,NaCl5g,自來水100ml,pH7.2?7.4①蔗糖：牛肉膏3g,蛋口腺10g,蔗糖1.905g,NaCI5g,自來水100ml,pH7.2~7.4②乳糖:牛肉膏3g,蛋白腺10g,乳糖1.905g,NaCI5g,自來水100ml,pH7.2?7.43?器皿：電子天平，燒杯，錐形瓶，量筒，培養(yǎng)皿，玻棒，涂布棒，移液管,pH試紙，棕色瓶，容量瓶，高壓蒸汽滅菌鍋，超凈工作臺，分光光度計，搖床，恒溫水浴鍋等。4.藥品：牛肉膏，蛋白腺，氯化鈉，蒸謂水，可

5、溶性淀粉，瓊脂，NaOH,碘化鉀，碘，十二水合磷酸氫二鈉，檸檬酸，乙酸，葡糖糖，果糖，蔗糖，乳糖。5.試劑（1）碘原液：稱取碘化鉀22g,加少量蒸謂水溶解，加入碘llg,溶解后定容至500mL,貯于棕色瓶中。（2）比色稀細碘液：取碘原液2mL,加碘化鉀20g,用蒸憾水定容至500mL,貯于棕色瓶中。（3）2%可溶性淀粉：稱取可溶性淀粉（干燥至恒重）2g,用少量蒸謂水混合調(diào)勻，倒入煮沸的蒸憾水中，邊加邊攪拌，煮沸2min后冷卻，加水定容至lOOmLo須當天配制。（4）pH6.0磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液：稱取磷酸氫二鈉

6、（旳2肝0_12也0）4.523g,檸檬酸0.807g,用水溶解并定容至lOOmLo（5）0.5mL/L乙酸溶液：0.5mL乙酸溶液定容至1L（6）0.85%生理鹽水：0.425gNaCI溶于50ml蒸憾水中6.其他：藥匙，記號筆，報紙等。四、實驗步驟及數(shù)據(jù)2011年10月25日①配制基本培養(yǎng)基1150ml,分裝50ml至250ml錐形瓶屮，共23瓶，用來擴增實驗菌株；②配制鑒別培養(yǎng)基：其中可溶性淀粉分為兩個梯度，每個梯度配制100ml,兩個梯度的可溶性淀粉含量分別為lg、1.8g;③配制稀釋用的生理鹽水0.85%

7、,63ml（l4根小試管每根分裝4.5ml生理鹽水）④包扎培養(yǎng)皿（9套）、錐形瓶（250mlX23）、移液管（lmlXlO）⑤121°C下滅菌20min⑥將實驗用菌株用生理鹽水梯度稀釋:101010巳10弋102IO”、IO?,加入lg淀粉的培養(yǎng)基選1010W7梯度涂平板,加入l?8g淀粉的培養(yǎng)基選10七10°、10〈梯度涂平板，每淀粉含量每梯度涂兩塊平板，共12塊。⑦在30°C下，培養(yǎng)兩天2011年10月27日①觀察生長狀況，挑選有單菌落的平板，在菌落周圍滴加碘液，看是否出現(xiàn)透明圈②若出現(xiàn)透明圈（且透明圈

8、較大），則挑取該菌落到基本培養(yǎng)基中，制成菌懸液，30°C、180rpm.搖床過夜，另挑取該菌落于斜面斜面培養(yǎng)基中保存。③菌落計數(shù)稀釋倍數(shù)W710'610'5菌落數(shù)（個）560無法計數(shù)15無法計數(shù)④計算細菌個數(shù)原菌懸液濃度：n=（5+15）4-2X107X5=7.5X108（個/mL）細菌個數(shù)：N=7.5X108X5=3.75X109（個）即原先平板上大約有3