化學發(fā)光免疫研究技術(shù)臨床應(yīng)用及探究進展

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1、化學發(fā)光免疫研究技術(shù)臨床應(yīng)用及探究進展【摘要】本文介紹了化學發(fā)光免疫分析技術(shù)的基本原理、分類及其在臨床醫(yī)學上的應(yīng)用研究進展。?【關(guān)鍵詞】化學發(fā)光免疫分析技術(shù);基本原理;分類;應(yīng)用近10多年來，當代生物技術(shù)的研究和應(yīng)用取得高速發(fā)展的同時，也大大推動了化學發(fā)光免疫分析方法(CLIA))的更新?lián)Q代速度?；瘜W發(fā)光免疫分析法(CLIA)是建立在放射免疫分析技術(shù)(RIA)理論的基礎(chǔ)上，以標記發(fā)光劑為示蹤物信號建立起來的一種非放射標記免疫分析法，具有靈敏度高、線性范圍寬、儀器設(shè)備簡單、操作方便、分析速度快和容易實現(xiàn)自動化和不

2、污染環(huán)境等優(yōu)點，特別是能在較短的時間內(nèi)得到實驗結(jié)果，因此深受檢驗醫(yī)學工作者和臨床醫(yī)師的好評。1化學發(fā)光免疫分析的原理?化學發(fā)光免疫分析技術(shù)的基本原理，化學發(fā)光免疫分析含有免疫分析和化學發(fā)光分析兩個系統(tǒng)［1］。免疫分析系統(tǒng)是將化學發(fā)光物質(zhì)或酶作為標記物，直接標記在抗原或抗體上，經(jīng)過抗原與抗體反應(yīng)形成抗原-抗體免疫復合物?；瘜W發(fā)光分析系統(tǒng)是在免疫反應(yīng)結(jié)束后，加入氧化劑或酶的發(fā)光底物，化學發(fā)光物質(zhì)經(jīng)氧化劑的氧化后，形成一個處于激發(fā)態(tài)的中間體，會發(fā)射光子釋放能量以回到穩(wěn)定的基態(tài)，發(fā)光強度可以利用發(fā)光信號測量儀器進行檢測

3、［2］。根據(jù)化學發(fā)光標記物與發(fā)光強度的關(guān)系，可利用標準曲線計算出被測物的含量。?2化學發(fā)光免疫分析的分類?化學發(fā)光免疫分析根據(jù)應(yīng)用發(fā)光體系應(yīng)用于免疫分析中的方式不同可分為直接標記發(fā)光物質(zhì)的免疫分析，酶催化化學發(fā)光免疫分析，電化學發(fā)光免疫分析(ECLIA)o直接標記發(fā)光物質(zhì)的免疫分析，目前常見的標記物主要為魯米諾類和11丫噪酯類化學發(fā)光劑。?3化學發(fā)光免疫分析的臨床應(yīng)用?CLIA已廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)和臨床醫(yī)學的各個領(lǐng)域，成為替代RIA的首選技術(shù)。Amersham公司針對AmerliteTM發(fā)光增強酶免疫分析系統(tǒng)研制出

4、的試劑盒項目有甲狀腺功能檢測的促甲狀腺素、三碘甲腺原氨酸、甲狀腺素、甲狀腺素結(jié)合球蛋白、游離甲狀腺素，與性激素有關(guān)的有促黃體激素、促卵泡激素、人絨毛膜促性腺激素、甲胎蛋白、雌二醇、睪酮,以及其他方面的如癌胚抗原、鐵蛋白、地高辛等。Amersham公司雖然研制出這10余種試劑盒，但因操作不夠簡便，檢測項目僅限于蛋白質(zhì)類大分子化合物，未能廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學檢測。?美國CibaCorning公司研制的ACS：180自動CLIA系統(tǒng)能非常精確測量閃光。經(jīng)過不斷的改進,實現(xiàn)了ACS：180CLIA系統(tǒng)的全自動化，推出全新

5、產(chǎn)品”ADVIA系列”?，F(xiàn)有檢測項目47項,更多的項目還在開發(fā)之中。主要有甲狀腺系統(tǒng)、性腺系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、腫瘤標記物、心血管系統(tǒng)、血藥濃度及其他一些檢測項目。?經(jīng)過改良后，金剛烷衍生物在堿性磷酸酶作用下可發(fā)出高強度的輝光，光信號可持續(xù)1?2ho隨后國外生產(chǎn)廠家研制出以堿性磷酸酶為標記物的試劑盒，與之相匹配的有DPC的IMMULITE全自動CLIA系統(tǒng)和Beckman的ACCESS全自動微粒子CLIA系統(tǒng)。IMMULITE全自動CLIA系統(tǒng)可檢測項目有心臟病、甲狀腺功能、性腺激素、傳染病、藥物、血清學、血液病、成

6、癮藥物、糖尿病、過敏檢測和腫瘤標志物oACCESS全自動微粒子CLIA系統(tǒng)主要可檢測甲狀腺功能、血液系統(tǒng)、內(nèi)分泌激素、藥物、腫瘤因子、心血管系統(tǒng)和糖尿病等項目。目前商品化的ECLIA分析系統(tǒng)只有Roche公司的ECLIA全自動分析系統(tǒng)。主要特點是本底信號極微，特異性更高，最小檢出值可達1pmol以下，操作十分簡便快速，是CLIA優(yōu)點較為集中的完美分析技術(shù)。已提供試劑盒的項目有腫瘤標志物、甲狀腺功能、內(nèi)分泌、傳染病、心肌標志物和維生素類等項目。?王陽［3］運用了電化學免疫分析技術(shù)，檢測了3種腫瘤標志物癌胚抗原(C

7、areinoem-bryonicAntigen,CEA)、細胞角蛋白19片段(Cytokeratin19fragments,CYFRA21,1)和神經(jīng)元特異性烯醇化酶(Neuron-specificenolase,NSE)水平，對肺癌診斷有實際應(yīng)用價值。張忠英［4］等利用電化學發(fā)光免疫分析技術(shù)檢測尿CK19片段，結(jié)果顯示尿CK19檢測對膀胱癌等泌尿系統(tǒng)腫瘤診斷和復發(fā)監(jiān)測具有敏感性高、無創(chuàng)傷性的優(yōu)點，優(yōu)于血清CK19和尿細胞學檢查。動態(tài)觀察尿CK19片段含量的變化可降低急性尿感患者的假陽性率。王利娜［5］等應(yīng)用E

8、CLIA測定和酶免疫測定(EIA)檢測乙肝標志物。結(jié)果：應(yīng)用ECLIA方法檢測HBsAg精密度，最大批內(nèi)變異W8.30%,最大日間變異W15.33%,HBsAg靈敏度0.05ng/ml,HBeAg靈敏度0.03NCU/mloHBsAg檢測范圍0.01?7000COIo顯示ECLIA檢測HBsAg靈敏度高，重復性好，檢測范圍寬。檢測HBeAg靈敏度可能更高。李錦洲⑹等采用ECLIA法對卵