淺談流感病毒檢驗

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1、淺談流感病毒檢驗淺談流感病毒檢驗【中圖分類號】R446【文獻標識碼】A【文章編號】1005-2720（2010）08-67-01流行性感冒病毒,簡稱流感病毒，是一種造成人類及動物患流行性感冒的RNA病毒，在分類學上，流感病毒屬于正黏液病毒科,它會造成急性上呼吸道感染，并借市空氣迅速的傳播,在世界各地常會有周期性的大流行。流行性感冒病毒在免疫力較弱的老人或小孩及一些免疫失調的病人會引起較嚴重的癥狀，如肺炎或是心肺衰竭等。病毒最早是在1933年由英國人威爾遜•史密斯（WilsonSmith）發(fā)現(xiàn)的,他稱為H1N1。H代表血凝索;N代表神經氨酸酶。數(shù)字代表不同

2、類型。1病毒的核心病毒的核心包含了存貯病毒信息的遺傳物質以及復制這些信息必須的酶。流感病毒的遺傳物質是單股負鏈RNA,簡寫為ss-RNA,ss-RNA與核蛋白（NP）向結合，纏繞成核糖核蛋白體（RNP）,以密度極高的形式存在。除了核糖核蛋白體，還有負責RNA轉錄的RNA多聚酶。甲型和乙型流感病毒的RNAFtl8個節(jié)段組成，丙型流感病毒則比他們少一個節(jié)段，第1、2、3個節(jié)段編碼的是RNA多聚集酶，第4個節(jié)段負責編碼血凝素；第5個節(jié)段負責編碼核蛋白，第6個節(jié)段編碼的是神經氨酸酶；第7個節(jié)段編碼基質蛋白，第8個節(jié)段編碼的是一種能起到拼接RNA功能的非結構蛋白，這種蛋白的苴

3、他功能尚不得而知。丙型流感病毒缺少得是第六個節(jié)段，其第四節(jié)段編碼的血凝素可以同時行使神經氨酸酶的功能。2樣本采集2.1采樣液Hank平衡鹽、細胞培養(yǎng)液、牛肉浸液（小牛肉浸膏10g＞牛血清白蛋白2g,加蒸惚水至400ml.慶大霉素40mg.多粘菌素BO.8mg,過濾除菌）等均可作采樣液。2.2采集鼻咽腔拭子標本（1）咽拭子:用棉簽擦拭雙側扁桃體及咽后壁，將棉簽頭部侵入2?3ml采樣液屮。（2）鼻咽抽取物:用與負壓泵和連的收集器從鼻咽部抽取粘液。先將收集器頭部插人鼻腔、接通負壓,旋轉收集器頭部并緩慢退出。收集抽取的粘液，并用采樣液刷洗收集器3次。⑶含漱液:用8~10以采

4、樣液漱口。2.3收集血清標本血清標本應包括急性期和恢復期雙份血清。急性期應在發(fā)病7天內采集，恢復期則在發(fā)病后2?4周采集。血液標木以2500r/min離心15min,收集血清，棄血凝塊。2.4標木運送病毒分離標木采集后應立即低溫保存，應盡快送至實驗室。24?48h內樣品可置4°C保存，如48h內未能進行接種，應置-70°C或以下保存。血清標本可在4匯存放一周，在-20°C長期保存。2.5標木處理咽拭了標木，收集管于混合器充分震蕩，用無菌銀子取出棉拭子并在管壁上反復擠壓棉拭子后棄拭子，標本加入雙抗（青霉素、鏈霉素）終濃度為1000IU/ml,混勻置4°C2h方可接種或

5、低溫保存;含漱液標本，混勻后自然沉淀，取上清液3ml,加雙抗;鼻咽抽取物標本，取無菌毛細吸管將洗液反復吹打，把粘液打散，而后按上述方法進行處理;器官組織標本，先用無菌的乳缽磨碎，用牛理鹽水配成20%懸液,2000r/min離心lOmin,取上清液3ml按上述方法進行抗菌處理。3檢驗方法3.1材料與方法3.1.1器材孵卵箱（38°C、33?35°C:各一個）、照卵器、卵盤、注射器、消毒劑、銀子、無菌生理鹽水、毛細吸管、試管、液體石蠟和封口膠等。3.1.2方法當今國內外常用狗腎傳代細胞（MDCK）o將已長成單層的細胞管棄生長液,用含有100IU/ml雙抗HanKJs液洗

6、2遍，用0.2?0.4ml處理過的標木液接種于細胞管,每份標本接種4管，置35T吸附1?2h后棄標木液，加入病毒培養(yǎng)液，其量為生長液的2倍。如標木液清亮和進行病毒傳代吋，可不必吸附，直接加入。置33?35°C孵育7do從笫3d開始觀察細胞病變（CPE）,如細胞出現(xiàn)顆粒增多、變圓、脫落達+++~++++吋進彳亍收獲。如果7d還不出現(xiàn)CPE,可收集病毒培養(yǎng)液做血細胞凝集試驗，在做試驗前將細胞管凍融1?2次，以提高病毒滴度。陽性者可測定其血凝滴度并鑒定之，陰性者混合4管細胞液盲傳2代，仍為陰性則棄去。2.2病毒鑒定新分離的病毒可用血細胞凝集抑制試驗、補體結合試驗和中和試驗

7、等方法進行鑒定。最常用和簡單的方法是血細胞凝集抑制試驗,必要吋采用補體結合試驗。2.3快速診斷流感病毒的主要感染部位是呼吸道上皮細胞，在病人呼吸道標本的脫落細胞中含有流感病毒抗原,通過直接檢查脫落上皮細胞內抗原即可診斷。標本最好采用負壓抽吸法收集呼吸道分泌物。3.4血清學診斷病毒分離是診斷流感最常用的方法之一,如因各方面因素未分離出病毒，血清學亦可作為一種代替手段，但必須收集急性期和恢復期雙份血清，如恢復期血清特異性抗體較急性期增高4倍或以上，即可診斷。本章介紹兩種常用的方法:血凝抑制試驗和中和試驗。4小結流行性感冒病毒(influenzavirus)簡稱流感病