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《熱療對順鉑耐藥卵巢癌化療增敏作用體外實驗探究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、熱療對順鉗耐藥卵巢癌化療增敏作用體外實驗探究摘要：目的：熱療是一種古老的療法，熱療除了能夠直接殺傷癌細(xì)胞外，還具有放射增敏和化療增敏作用。本實驗研究的目的旨在探討熱療與順鉗聯(lián)合對人卵巢癌順鉗耐藥細(xì)胞株CA0V3/cDDP的生長抑制作用以及溫度與藥效的關(guān)系。方法：將熱療(42￡)和順鉗(6、12、24ug/mL)分別單獨以及聯(lián)合作用于體外培養(yǎng)的人卵巢癌CA0V3/cDDP細(xì)胞株。采用MTT(methylthiazolyltetrazolium)法檢測各實驗組人卵巢癌耐藥細(xì)胞株CA0V3/cDDP的生長抑制率；采用集落形成實驗觀察各實驗組對人卵巢癌耐藥細(xì)胞株CA0V3/cDDP的誘導(dǎo)分化作用；
2、應(yīng)用光鏡觀察實驗處理前后人卵巢癌CA0V3/cDDP細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)的變化，確定凋亡細(xì)胞，評價各組細(xì)胞凋亡程度。結(jié)果：42匸熱療單獨作用對腫瘤細(xì)胞的生長僅有輕度抑制作用，但它能顯著增強順鉗對腫瘤細(xì)胞的抑制效應(yīng)。受熱421的順鉗與37。(2生理溫度下的順鉗相比較,前者對體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞有明顯的殺傷作用(P50個細(xì)胞的克隆數(shù)。取3個復(fù)孔均值，按下式計算集落形成率。集落形成率(%)=(實驗組集落均數(shù)/空白對照組集落均數(shù))X100%3.4細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察3.4.1相差顯微鏡觀察經(jīng)上述處理后，相差顯微鏡下動態(tài)觀察，接種于蓋玻片上的對照組和各實驗組細(xì)胞的形態(tài)變化。3.4.2光學(xué)顯微鏡觀察經(jīng)上述處理及動態(tài)
3、觀察后，將培養(yǎng)皿中的蓋玻片撈出，PBS液漂洗2次，95%酒精室溫固定20?30min,0.05%瑞氏-吉姆薩染色15?30min,沖洗涼干，二甲苯透明后，直接反轉(zhuǎn)，放于潔凈載玻片上，樹膠封片。光鏡下觀察，確定凋亡細(xì)胞。3.5數(shù)據(jù)處理采用F檢驗，t檢驗，SPSS11.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計分析。4結(jié)果4.1卵巢癌CA0V3/cDDP細(xì)胞生長抑制率MTT法測定化療組、熱化療組細(xì)胞生長抑制率結(jié)果見表2O4.2藥物聯(lián)合作用結(jié)果計算熱療與順鉗相互作用指數(shù)(CDI)值，熱療與各濃度順鉗聯(lián)合作用于卵巢癌CA0V3/cDDP細(xì)胞60min,CDK0.7,說明42￡熱療對順鎧具有非常顯著的協(xié)同增敏作用。詳見表
4、3o4.3卵巢癌CA0V3/CDDP細(xì)胞集落形成率實驗組較對照組相比集落生長特性明顯降低，細(xì)胞呈單個生長狀態(tài)，且單個集落中細(xì)胞數(shù)顯著少于對照組。熱化療組細(xì)胞集落形成率較單獨化療組明顯降低(P<0.01),說明熱療對化療具有顯著增敏作用。此實驗結(jié)果同MTT檢測的結(jié)果相一致。4.4細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化相差顯微鏡動態(tài)觀察了對照組和各實驗組細(xì)胞形態(tài)的變化，根據(jù)上述藥物作用效應(yīng)分級標(biāo)準(zhǔn)，評價各實驗組藥物作用等級，詳見表4。觀察發(fā)現(xiàn)藥物作用強度在一定范圍內(nèi)呈現(xiàn)對濃度、溫度和時間的正相關(guān)性。各實驗處理對人卵巢癌CAOV3/cDDP的作用主要表現(xiàn)在對卵巢癌細(xì)胞貼壁能力的影響和細(xì)胞大小、形態(tài)的變化。藥物作用等級不
5、同，對卵巢癌CA0V3/cDDP細(xì)胞的影響也不同：藥物作用效應(yīng)在3?4度之間的各實驗組，給藥12h細(xì)胞就出現(xiàn)體積縮小、皺縮、不規(guī)則分裂、胞膜出泡現(xiàn)象，細(xì)胞貼壁能力明顯下降，許多細(xì)胞脫落呈漂浮生長狀態(tài)，隨作用時間延長，脫落細(xì)胞逐漸增多，至24h時約70%?80%的細(xì)胞呈懸浮生長；作用效應(yīng)在2?3度之間的各實驗組，藥物作用后，細(xì)胞逐漸變圓、變粗糙、折光性減弱，24h這種現(xiàn)象更明顯，同時有部分細(xì)胞鼓泡、漂浮；作用效應(yīng)在1?2度之間的各實驗組，藥物作用后細(xì)胞稍變小，大多數(shù)細(xì)胞仍呈梭性，部分細(xì)胞變圓，隨時間延長改變明顯，24h可見大多數(shù)細(xì)胞變小變圓，細(xì)胞貼壁能力稍下降，極少細(xì)胞脫落，細(xì)胞生長仍呈集落
6、性?？瞻讓φ战M未出現(xiàn)上述現(xiàn)象，細(xì)胞呈典型梭形、平滑、折光性好，分裂期細(xì)胞變成圓形，折光變強（見圖1?3）。5討論熱療是一種古老的療法，隨著基礎(chǔ)研究的深入及熱療設(shè)備的開發(fā)研制和應(yīng)用，熱療已得到了迅速的發(fā)展。熱療除了能夠直接殺傷癌細(xì)胞外，還具有放射增敏和化療增敏作用。熱療造成的組織損傷主要取決于作用溫度和持續(xù)時間，41°C以上即可以產(chǎn)生癌細(xì)胞殺傷作用，酸性環(huán)境對上述機制有促進作用。熱療劑量是影響療效的最重要因素之一。體內(nèi)及體外實驗均證實熱療可以促進一些化療藥物的細(xì)胞毒作用。對大多數(shù)化療藥物而言，中等程度的熱療（40.5°C?43。0可以最大限度地促進其療效。但目前尚缺乏標(biāo)準(zhǔn)化的熱化療模式。本實
7、驗采用對順鉗耐藥的CA0V3/cDDP人卵巢癌細(xì)胞進行實驗研究。實驗結(jié)果顯示，42￡熱療單獨作用對腫瘤細(xì)胞的生長僅有輕度抑制作用，但它能顯著增強順鉗對腫瘤細(xì)胞的抑制效應(yīng)。受熱421的順鉗與37乜生理溫度下的順鉗相比較，前者對體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞有明顯的殺傷作用（P<0.01）,說明順鎧作用的增強與溫度的升高呈正相關(guān)性。藥物聯(lián)合作用評價結(jié)果也提示，熱療與順鉗藥效之間存在著相互協(xié)同增敏作用。本研究結(jié)果說明抗順鉗的細(xì)胞低溫?zé)岑熢?/p>
