解脲支原體MB蛋白金標(biāo)檢測(cè)試劑盒膠體金法作業(yè)指導(dǎo)書(shū)

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1、解腺支原體MB蛋白金標(biāo)檢測(cè)試劑盒膠體金法作業(yè)指導(dǎo)書(shū)1目的建立解月尿支原體MB蛋白金標(biāo)檢測(cè)試劑盒（膠體金法）作業(yè)指導(dǎo)書(shū)，確保生產(chǎn)過(guò)程處于受控狀態(tài)。適用于解服支原體MB蛋白金標(biāo)檢測(cè)試劑盒（膠體金法）相關(guān)工序的操作者。3職責(zé)3.1操作人員應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行本作業(yè)指導(dǎo)書(shū)。3.2生產(chǎn)主管負(fù)責(zé)監(jiān)督檢查。3.3質(zhì)檢部質(zhì)檢員負(fù)責(zé)抽查執(zhí)行情況。4工作內(nèi)容4.1生產(chǎn)工藝流程圖解豚重抗NC組抗原原膜的表達(dá)檢包—?測(cè)—?被NC反應(yīng)膜檢涮★NC膜處理NC膜檢測(cè)兔抗鼠抗IgG抗體體制備>檢測(cè)注：探關(guān)鍵過(guò)程★特殊過(guò)程4.2作業(yè)內(nèi)容4.2.1膠體金制備

2、（檸檬酸三鈉述原法）氯金酸（HAuCb）水溶液放入三角瓶?jī)?nèi)加熱至沸騰一加熱檸檬酸三鈉溶液-混勻，攪拌煮沸10至15分鐘一待膠體金溶液顏色由藍(lán)一紫-＞紅，冷卻即可。4.2.2金標(biāo)抗體（反應(yīng)膜）制備以0.1M碳酸鉀溶液調(diào)膠體金溶液pH8.0-9.0-加入解腺支原體單抗，15分鐘后加入聚乙二醇一離心，調(diào)532nm測(cè)OD值5?10,方陣滴定法選定標(biāo)記工作濃度一用無(wú)紡布浸濕膠體金溶液，干燥、平整，檢測(cè)。4.2.3金標(biāo)抗體反應(yīng)膜質(zhì)檢將制備好的金標(biāo)抗體反應(yīng)膜按5%。比例抽檢，與標(biāo)準(zhǔn)反映膜兀配組裝成品，同時(shí)與標(biāo)準(zhǔn)成品作如下對(duì)照檢

3、測(cè)。a）符合率：樣品稀釋液、陰性質(zhì)控品無(wú)假陽(yáng)，高、中、低濃度（0」ug/mK1.0ug/ml>10ug/ml）支原體陽(yáng)性質(zhì)控品均呈陽(yáng)性。b）敏感度：最小檢出0.1ug/ml支原體陽(yáng)性質(zhì)控品。c）反應(yīng)強(qiáng)度：+/+++邙日性反應(yīng)線/陰性反應(yīng)線）。d）反應(yīng)時(shí)間：30s?5min。確認(rèn)合格后才能轉(zhuǎn)入下一工序。4.2.4NC反應(yīng)膜制備親和性高分子硝酸纖維素膜一活化處理12小時(shí)一用水洗5次，每次20分鐘?室溫干燥后一取純解嫌支原體MB蛋白單抗和兔抗鼠IgG抗體溶于10%CS中,濃度均為2mg/ml,用解啄支原體單抗在NC膜上

4、包被衣原體陽(yáng)性反應(yīng)線-*用兔抗鼠IgG抗體在NC膜上包被陰性對(duì)照線一干燥后，用BS液封閉H20清洗后，室溫干燥，備用。4.2.5NC反應(yīng)膜質(zhì)檢4.2.5.1常規(guī)圖形模式檢測(cè)：將制備好的反應(yīng)膜按5%。比例抽檢，與標(biāo)準(zhǔn)金標(biāo)抗體反應(yīng)膜匹配組裝成品，同時(shí)與標(biāo)準(zhǔn)成品對(duì)照檢測(cè)；觀察陽(yáng)性、陰性包被線及本底，要求圖形規(guī)則程度均勻，無(wú)遺漏或重復(fù)包被。4.2.5.2均一性，靈敏性和符合率篩選：按3%比例/批，隨機(jī)取樣，每張5?10人份，作陰性參比品和高、中、底(0.1口g/ml、1.0Pg/mK10ug/ml)三個(gè)濃度的陽(yáng)性參比品檢

5、測(cè)，靈敏度解腺支原體最小檢岀g/ml,無(wú)假陽(yáng)性，均一性299%。4.2.6反應(yīng)體系組裝組裝材料材料規(guī)格(mm)組裝方式反應(yīng)膜(S1)20見(jiàn)圖1無(wú)紡布(S2)25,30吸水紙(S3)30金標(biāo)反應(yīng)膜(S4)10雙而膠帶(S5)29,48塑料墊板S678單面膠帶S7154.2.6.1反應(yīng)體組裝程序：a)在S6塑料基板上貼雙而膠帶S5(29,48mm)二條；b)在S5上貼反應(yīng)膜SI(20mm),S1上下緣距S6上下緣各29mm；c)在S6上貼吸水紙S3(30mm),吸水紙下緣與S1上緣交接1mm,上緣與S5的上邊緣對(duì)齊；

6、d)在S5下端貼無(wú)紡布S2-1,其上緣壓住S1下緣1mm；e)在S2-1±平放金標(biāo)抗體反應(yīng)膜S4(10mm)上緣對(duì)齊；0在S4上平放無(wú)紡布S2?2(30mm)上下緣分別S4、S6對(duì)齊；g)將組裝成型的反應(yīng)體系用電腦可調(diào)式切割機(jī)切成5mm測(cè)試條，裝入干燥器，待包裝。4.2.6.2成品包裝：每支成品先裝聚苯乙烯塑料外殼，再用鍍鋁膜包裝加干燥劑,附說(shuō)明書(shū)，打批號(hào)入庫(kù)，每批留樣100人份，以備復(fù)檢.4.2.7質(zhì)控甜制備4.2.7.1解服支原體MB蛋白陽(yáng)性質(zhì)控品取基因工程表達(dá)解月尿支原體MB蛋白抗原，以樣品稀釋液（A液和B

7、液1：1混合液）分別配成高、中、低（10Ug/ml,lug/ml,0.1ug/ml）三個(gè)濃度，0.5ml/支分裝，?70°C保存。4.2.7.2解U尿支原體MB蛋白陰性質(zhì)控品含0.1mg/ml牛血清白蛋白樣品稀釋液（A液和B液1：1混合液），0.5ml/支分裝，?70°C保存。4.3成品檢測(cè)《解尿支原體MB蛋白金標(biāo)檢測(cè)試劑盒（膠體金法）》產(chǎn)品注冊(cè)標(biāo)要求。4.3.1外觀4.3.1」要求a）檢測(cè)條：表面應(yīng)平整、無(wú)劃傷、開(kāi)裂、變形及污漬；檢測(cè)卡各組分附著牢固、內(nèi)容齊全；b）檢測(cè)卡：外殼應(yīng)平整，上下蓋應(yīng)均勻合攏，無(wú)明顯間

8、隙；反應(yīng)芯試條在外殼內(nèi)應(yīng)附著牢固；4.3.1.2檢驗(yàn)在自然光線下，用手感和目力觀察方法進(jìn)行檢驗(yàn)。4.3.2靈敏度4.3.2.1要求檢測(cè)卡可以測(cè)定出0.1Mg/ml的解）1尿支原體MB蛋口，凡解腺支原體MB蛋白等于和高于該濃度時(shí)檢測(cè)線和對(duì)照線均顯色，而低于該濃度時(shí)檢測(cè)線不顯色,但無(wú)論任何濃度對(duì)照線均應(yīng)顯色。4.3.2.1測(cè)試a）試劑1）X白對(duì)照液：樣品稀釋液；2）測(cè)定樣品液