抗菌藥物敏感性試驗

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1、抗菌藥物敏感性試驗?zāi)先A大學(xué)預(yù)防醫(yī)學(xué)與放射衛(wèi)生實驗教學(xué)中心教學(xué)對象：高等醫(yī)學(xué)院校衛(wèi)生檢驗專業(yè)學(xué)生實驗課時：4學(xué)時課程類型：專業(yè)實驗課課程要求：必修每組人數(shù)：2人實驗?zāi)康暮鸵笳莆占埰瑪U散法（K－B法）的原理、操作方法等、結(jié)果判斷、意義及質(zhì)量控制；熟悉肉湯稀釋法抗生素敏感性試驗的原理、操作方法、結(jié)果判斷及意義等；了解稀釋法的質(zhì)量控制。實驗內(nèi)容常用抗菌藥物敏感性試驗與耐藥檢測方法介紹。紙片擴散法。肉湯稀釋法。一、常用抗菌藥物敏感性試驗與耐藥檢測方法介紹紙片擴散法（Kirby-Bauertest）稀釋法（dilutiontest）E試驗法（Etest）聯(lián)合藥物敏

2、感試驗特殊耐藥菌及耐藥酶的表型檢測耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的檢測β-內(nèi)酰胺酶、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶檢測等二、紙片擴散法（K-B法）原理：含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測試菌的瓊脂平板上，紙片所含的藥物吸取瓊脂中的水分溶解后便不斷向紙片周圍區(qū)域擴散，形成遞減的梯度濃度。在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)的細(xì)菌生長被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度，并與該藥對測試菌的最低抑制濃度（minimalinhibitoryconcentration，MIC）呈負(fù)相關(guān)，即抑菌圈愈大，MIC愈小。抑菌圈含藥紙片方法：菌液制備：挑取孵育16-2

3、4h的血平板上數(shù)個菌落置于生理鹽水管中，校正濃度至0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)；涂布接種：無菌棉拭蘸取菌液，在試管壁旋轉(zhuǎn)擠去多余菌液后在MH瓊脂表面均勻涂布接種3次，每次旋轉(zhuǎn)平板60o，最后沿平板內(nèi)緣涂抹1周；貼含藥紙片：平板在室溫下干燥3-5min，用無菌鑷子將含藥紙片緊貼于瓊脂表面，各紙片中心相距應(yīng)大于24mm，紙片距平板內(nèi)緣應(yīng)大于15mm；孵育：35oC16-18h，量取抑菌圈直徑。結(jié)果判讀：用刻度尺量取抑菌圈直徑，根據(jù)CLSI（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute）標(biāo)準(zhǔn)判讀結(jié)果；報告：細(xì)菌對該抗生素是敏感（suscep

4、tible，S）；耐藥（resistant，R）；還是中介（intermediate，I）。表1金黃色葡萄球菌抗菌藥物敏感性試驗評價結(jié)果抗菌藥物紙片含藥量抑菌圈直徑(mm)相應(yīng)MIC值(μg/ml)耐藥中介敏感耐藥敏感青霉素10U≤28—≥29β-內(nèi)酰胺酶≤0.12苯唑西林1μg≤1011～12≥13≥4≤2萬古霉素30μg——≥15—≤4慶大霉素10μg≤1213～14≥15≥8≤4紅霉素15μg≤1314～22≥23≥8≤0.5克林霉素2μg≤1415～20≥21≥4≤0.5磺胺藥1.25/23.75μg≤1011～15≥16≥8/152≤2/38三

5、、肉湯稀釋法原理：以水解酪蛋白（MH）液體培養(yǎng)基將抗生素做不同濃度的稀釋，然后種入待檢細(xì)菌，定量測定抗菌藥物對被測菌的最低抑菌濃度（MIC）或最低殺菌濃度（MBC）。方法：試管編號：取26只試管排成兩排（測試菌排，質(zhì)控菌排）每排13支編號。另取3支試管，分別標(biāo)記上“肉湯對照”、“測試菌生長對照”和“質(zhì)控菌生長對照”等對照。抗菌藥物稀釋：用MH肉湯倍比稀釋抗菌藥物至13管，稀釋后使每管含抗菌藥物稀釋液2ml。肉湯對照、測試菌生長對照、質(zhì)控菌生長對照管：分別加入MH肉湯2ml。方法：菌液制備：生理鹽水校正測試菌和質(zhì)控菌至0.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)，再用MH肉湯稀釋到

6、107CFU/ml；加菌液：用微量加樣器取0.1ml稀釋菌液由低到高加于各排試管中，其最終的接種量為5×105CFU/ml。測試菌排、測試菌生長對照管加測試菌液；質(zhì)控菌排、質(zhì)控菌生長對照管加質(zhì)控菌液。孵育：35oC24h觀察結(jié)果。結(jié)果：測試菌（或質(zhì)控菌）不出現(xiàn)肉眼可見生長的最低藥物濃度為該藥對測試菌（質(zhì)控菌）的MIC。注意事項：培養(yǎng)基、接種細(xì)菌的菌量、抗菌藥物紙片的質(zhì)量、孵育溫度和觀察時間、操作是否規(guī)范等均能影響本試驗的結(jié)果。為保證結(jié)果的可靠性，需同時采用相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)菌株同時進(jìn)行藥敏試驗作為質(zhì)量控制的方式。