微生物快速鑒定技術(shù)發(fā)展及應用

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1、微生物快速鑒定技術(shù)發(fā)展及應用【摘要】現(xiàn)代生物學發(fā)展迅速，傳統(tǒng)的生物鑒定技術(shù)雖結(jié)果準確，但操作起來麻煩，所花費的時間較多，且需要耗費大量的人力物力，在現(xiàn)代科學技術(shù)大發(fā)展的背景下，微生物鑒定技術(shù)得到了迅猛發(fā)展，有些技術(shù)已廣泛應用于實驗，但一部分技術(shù)因成本高、價格貴，不易為基層所接受?！娟P鍵詞】微生物；快速鑒定技術(shù)；發(fā)展；應用文章編號：1004-7484(2013)-02-0892-02傳統(tǒng)的微生物檢測技術(shù)及方法已不能適應微生物學的迅速發(fā)展，生化鑒定或者血清學分型是傳統(tǒng)微生物檢測技術(shù)之一，盡管這些方法具有極高的準確性，但操作起來極其繁瑣，實驗所用的時間較長，且需要大量的人員參與，耗時耗

2、力，而且對病原菌的檢測的難度相當大。為此，微生物學正力求尋求一種快速、準確、省時、省力且省成本的快速檢驗方法。目前，伴隨微生物學的迅猛發(fā)展，相關技術(shù)得以體現(xiàn)和應用，現(xiàn)概括如下。1分子生物學技術(shù)1.1PCRPCR檢測技術(shù)是指通過將合成的DNA片段變性-延伸-復性的反復性操作，使得DNA模板以百倍的數(shù)量增長,并對DNA產(chǎn)物的熒光條帶加以檢測，從而確定微生物的種類。此種技術(shù)敏感性極高，且在某種程度上具有特異性，從理論上看，它可以檢出一個細菌的拷貝基因，所以，此種技術(shù)的優(yōu)點之一便是有效縮減了增菌時間。而且，此種檢測技術(shù)能夠?qū)Υ竽c桿菌、肉毒桿菌、李氏桿菌以及沙門桿菌等病原菌進行定量檢查，一

3、定程度上擴大了檢測范圍。盡管熒光定量PCR技術(shù)目前已被認可，其檢測的準確性較高，但價格昂貴,成本偏高，在基層難以開展。1.2基因探針技術(shù)對于基因探針技術(shù)，我們又可稱之為分子雜交技術(shù)，其原理主要是利用DNA分子的高度精確性探查某一特異性DNA序列。對于此種技術(shù)的運用首要的就是要對探針進行標注?；蛱结樇夹g(shù)運用起來快速敏捷，且精確度較高。但是此種技術(shù)也有它的不足之處，如果要對某一種菌進行檢測，相應的，需制備一種探針，在鑒別上還有局限，有待進一步發(fā)展。1.3基因芯片技術(shù)利用微電子或者微加工技術(shù)將成千上萬的基因寡核昔酸有序地排列在纖維膜或者硅片上，由此而得到某種信息的技術(shù)，我們稱之為基因

4、芯片技術(shù)。此種技術(shù)的運用需結(jié)合以上PCR以及基因探測技術(shù)等，并與寡核昔酸點混合，再利用掃描儀對熒光分布模式進行觀察和分析，最后確定檢測樣品上的微生物。因可以一次大量使用探針，所以對樣品的檢測也可以一次性多個，從而縮減了檢測時間，簡化了檢測步驟。就目前來看，雖然此種技術(shù)具有很好的發(fā)展前景，但其價格昂貴，靈敏度還有待提高，且分析能力較差，還需改進。2免疫學技術(shù)免疫學技術(shù)主要是指對抗原和抗體的結(jié)合反應作出觀察，并通過免疫放大技術(shù)對細菌加以鑒別，此種技術(shù)的靈敏度較高，且檢測迅速，檢測效果好，沒有過高的技術(shù)要求，目前已被廣泛運用。2.1乳膠凝集反應乳膠凝集反應是指人工大分子乳膠顆粒標記抗體

5、與待測抗原發(fā)生了凝集反應，且此種反應肉眼可見，從而可以對目標病原微生物或者毒素進行檢測。2.2酶聯(lián)免疫法（ELISA）酶聯(lián)免疫法是指將抗原或者抗體與某種酶連接成酶標抗原或者抗體。具體測定時，讓受檢標本或者酶標抗原（抗體）按不同的步驟與固相載體表面的抗原（抗體）起反應，并將起反應后的復合物與其他物質(zhì)分開。再加入酶反應的底物，此時底物會被酶催化成有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量存在相關性，我們可以觀察顏色的變化，從而對檢測物進行分析。酶具有極高的催化頻率，我們可故意放大反應效果，從而抬高技術(shù)的靈敏度。2.3免疫磁性分離法將抗體偶聯(lián)于磁性顆粒的表面，此種結(jié)合具有一定的磁響應性，從

6、而可以對免役磁性微球與待檢測的混合物進行共同培養(yǎng)，此種方法我們稱之為免疫磁性分離法。經(jīng)過抗元抗體的反應，免疫性微球與待檢測的微生物的靶物質(zhì)相結(jié)合，此時通過一個磁場裝置的整合，微生物滯留在磁場中，從而得以將微生物分離。3選擇、鑒定用培養(yǎng)基法選擇鑒定用培養(yǎng)基法是通過將生化反應底物以及酶反應底物等加入培養(yǎng)基，從而將分離與鑒定快速完成。此種方法操作簡便，可接受性強，值得應用和推廣。4快速測試片法將培養(yǎng)基或者顯色物質(zhì)附著在紙片或者膠片上面，觀察微生物的生長、顯色，最終測定食品中的微生物。對于紙片的選擇，目前較多使用的是濾紙，除此之外，美國3M公司生產(chǎn)的PF(Petrilm)試紙也頗受歡迎。

7、采用紙片法，可檢測出包括大腸菌群、沙門菌、霉菌以及葡萄球菌等在內(nèi)的各種菌類。此種方法成本低，使用簡便，攜帶方便，目前應用較廣泛。5細菌直接計數(shù)法細菌直接計數(shù)法主要包括兩種，即流式細胞儀(FCM)和固相細胞計數(shù)(SPC)法。流式細胞計數(shù)靈敏度較高，可同時進行定量和定性分析。目前已廣泛應用于細菌總數(shù)以及大腸埃希氏菌等的檢測。6全自動微生物分析系統(tǒng)(AMS)全自動微生物分析系統(tǒng)介入了現(xiàn)代計算機技術(shù)，它將現(xiàn)代計算機技術(shù)與微生物檢測技術(shù)相結(jié)合，進行自動微生物檢測。它完全脫離了微生物的分離培