阿維a對硬皮病小鼠的治療作用及機制研究

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1、阿維A對硬皮病小鼠的治療作用及機制研究［摘要］目的研究阿維A(acitretin)對系統(tǒng)性硬皮病(SSc)小鼠皮膚及肺部纖維化的治療作用，并通過檢測小鼠外周血Thl7/Treg相關(guān)因子白介素(IL)-17.IL-10、IL-6、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-B1水平，探討阿維A治療硬皮病可能的機制。方法24只雌性BALB/c小鼠隨機分為対照組、硬皮病組和阿維A組，硬皮病組和阿維A組給予博萊霉素皮下注射4周，阿維A組同時每天給予6mg/kg的阿維A灌胃4周。4周后取注射部位皮膚及肺部制作組織病理切片，觀察小鼠皮膚厚度及皮膚/肺部炎癥。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA

2、)檢測小鼠血清IL-17、IL-10、IL-6、TGF-31水平。結(jié)果阿維A組皮臍厚度、皮膚炎癥評分、肺部炎癥評分均明顯低于硬皮病組［(140.25±20.24)um比(191.88±40.95)um,(0.75±0.01)分比(2.00±0.76)分，(1?38土0?52)分比(2.00±0.92)分,P<0.05］。阿維A組血清11-17.IL-6、TI-10均顯著低于硬皮病組［(50.69±11.72)pg/mL比(66.89±16.62)pg/mL,(85.77±12.06)pg/mL比(118.68±22.62)pg/mL,(57.65±21

3、.74)pg/mL比(131.07±22.52)pg/mL,P<0.05］o三組小鼠血清TGF-B1水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論阿維A可顯著改善硬皮病小鼠皮膚及肺部癥狀，其作用機制可能與影響Thl7/Treg的平衡有關(guān)。［關(guān)鍵詞］硬皮??；阿維A；IL-17；IL-6；IL-10［中圖分類號］R593.25［文獻(xiàn)標(biāo)識碼］A［文章編號］1673-7210(2013)09(a)-0020-03系統(tǒng)性硬皮病(systemicsclerosis,SSc)是一種以皮膚及內(nèi)臟器官纖維化或硬化，最后發(fā)展至萎縮為特點的結(jié)締組織?。?］。在我國結(jié)締組織病中碩皮病的發(fā)病率高，

4、病因及發(fā)病機制復(fù)雜，治療手段有效。維A酸類藥物在表皮分化、真皮重建及皮膚炎癥中發(fā)揮重要作用，臨床上主要用于治療銀屑病、痙瘡及角化過度性皮膚病。近年來，維A酸的抗纖維化作用逐漸得到認(rèn)識，文獻(xiàn)報道阿維A可緩解硬皮病患者皮膚硬化，且對皮肽硬化為主的移植物抗宿主病(GVHD)冇效［2-3］o本試驗利用博來霉素構(gòu)建小鼠碩皮病模型，觀察阿維A對皮膚和肺部纖維化的治療作用。輔助T細(xì)胞17(Thl7)是一種新的T細(xì)胞亞群，主要分泌白介素(IL)-17和IL-6,其在自身免疫病和過敏性疾病中發(fā)揮重要的免疫調(diào)節(jié)作用。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)與Thl7細(xì)胞均來源于共同的前體

5、細(xì)胞CD4+T細(xì)胞,兩者關(guān)系密切，Treg細(xì)胞主要分泌轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)和IL-10,在免疫耐受的誘導(dǎo)中發(fā)揮重耍作用，抑制自身免疫性疾病的發(fā)生［4］。文獻(xiàn)報道硬皮病患者存在外周血Thl7/Treg細(xì)胞體系失衡，本研究通過檢測小鼠外周血Thl7/Treg相關(guān)因子IL-17、IL-6、IL-10、TGF-01,探討阿維A治療硬皮病可能的機制，為硬皮病的發(fā)病機制及治療提供新的思路。1材料與方法1.1材料1.1.1實驗動物6周齡雌性SPFBALB/c小鼠，體重16?20g,共24只，購于北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，飼養(yǎng)于北京大學(xué)實驗動物中心，置于清潔

6、級環(huán)境，普通飼料和水飼養(yǎng)。1.1.2主要實驗試劑注射用鹽酸闿來霉素(BLM),15mg/支，產(chǎn)自日本化藥株式會社。阿維A膠囊，10mg/粒，產(chǎn)自重慶華邦制藥公司。小鼠IL-17、IL-10、IL-6、TGF-B1酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測試劑盒購自武漢博士徳生物工程有限公司。1.2方法1.2.1動物分組、模型的建立及給藥方法24只小鼠隨機分為對照組、硬皮病組和阿維A組，每組8只。實驗前用脫毛膏將背部毛發(fā)去除，標(biāo)記出一個1cmXlcm大小的注射區(qū)。參照文獻(xiàn)［5］建立SSc動物模型：對照組以酸鹽緩沖液(PBS)皮下注射，每次0.1mL,每日1次，共

7、4周；碩皮病組和阿維A組以300卩g/mL濃度的博萊簿素液皮下注射，每次0.1mL,每口1次，共4周。同時，在開始皮下注射博萊霉素的當(dāng)天，對照組、硬皮病組以0.9%NaCl灌胃,每00.2mL,阿維A組則用0.5mg/mL的阿維A溶液按照6mg/(kg?d)劑量灌胃(依照人體給藥劑量0.5mg/(kg?d)換算成小鼠的治療劑量為6mg/(kg-d),每日灌胃約0.2mLo1.2.2標(biāo)本的留取最后一次注射、灌胃24h后，小鼠通過眼眶動脈放血處死，收集血液1?2mL,以3000r/min離心20min,吸取上層血清，用ELISA法檢測IL-17、IL-10

8、、IL-6、TGF-B1水平，按試劑盒操作說明書進行。取小鼠背部無毛皮膚及肺臟，投入10%甲醛