黃花蒿中黃酮類成分的分離與鑒定

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1、黃花蒿中黃酮類成分的分離與鑒定卜俊恒內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院呼和浩特010059摘要目的：在對(duì)中藥黃花蒿進(jìn)行了活性研究之后建立了一種髙效液相色譜-串聯(lián)核磁共振同時(shí)測(cè)定中藥黃花蒿中黃酮類成分的方法.使用PhenomenexLuna,Cl8色譜柱，流動(dòng)相為甲醇一水溶液(67:33)，在檢測(cè)波長230nmT,分離出黃花蒿有效成分組中4個(gè)主要的成分，這些成分分別屬于生物菇類、黃酮類；并采用核磁共振方法鑒定其結(jié)構(gòu)。結(jié)果顯示：本實(shí)驗(yàn)共鑒定出四種成分，分別是：貓眼草黃素?機(jī)皮萬壽菊素?貓眼草酚?青蒿酸。對(duì)于上溯有效成分進(jìn)行

2、鑒定，能為更好地闡明中藥黃花蒿的有效成分及作用機(jī)制提供依據(jù)。關(guān)鍵詞黃花蒿；黃酮類化合物；高效液相色譜-串聯(lián)核磁共振黃屁篙又名青篙，為菊科植物黃花^Artemisiaanna的干燥地上部分;具有清熱解暑、除蒸、截瘧等功效⑷。20世紀(jì)70年代我國學(xué)者⑵從中分離得到的青蒿索,是含有過氧基團(tuán)的倍半祜內(nèi)酯類化合物,治療惡性腦瘧及抗氯嗤株瘧疾等疾病具有高效、速效、低毒等特點(diǎn)，是重要的抗瘧藥物⑷。對(duì)于黃花蒿的研究目前主要是從植物屮捉取分離青蒿素，由丁各種黃花蒿中的有效成分含量差別很大，有些含量很低，藥用價(jià)值不大

3、⑷。且如果黃花蒿中的有效成分含量低于5%。，就沒有工業(yè)提取價(jià)值?？谇爸饕臏y(cè)定方法有結(jié)晶稱重法、TLC法、HPLC法[3]等，由于青蒿索只冇末端吸收，因此需經(jīng)柱前衍生后才能測(cè)定⑸，也有人采用HPLC-ELSD方法測(cè)定⑹。黃花iWArtcmisiaannuaL.的主要活性成分為青蒿素，含量較低，而其中的某些黃酮類化合物可促進(jìn)青蒿素與血晶素的反，增強(qiáng)青蒿素的抗瘧性。對(duì)于黃花蒿的研究,長期以來的重點(diǎn)都集中于其抗瘧活性成分青蒿素及其類似物上，對(duì)其中含量較高的黃酮類化合物的研究尚未見報(bào)道。作者提出高效液相色

4、譜-串聯(lián)核磁共振方法,可同吋定性、定量分析青蒿素和黃酮類化合物。1實(shí)驗(yàn)部分1.1儀器與材料高效液相色譜-串聯(lián)核磁共振(日本島津一8A二元泵，，核磁共振檢測(cè)器，色譜柱填料:PRC-ODS色譜柱內(nèi)徑：2*25cm)。藥材自采；甲醇為色譜純；酸度計(jì)(DELTA320)(上海)有限公司；純水機(jī):上海醫(yī)療儀器廠水為二次蒸謂水。1.2樣品處理藥材混合后粉碎，用乙醇一水(55:45)加熱冋流提取3次，殘?jiān)靡掖技訜醿樟魈崛?次，合并提取液，回收溶劑,得到總黃酮。1.3實(shí)驗(yàn)條件色譜柱(2*25cm);柱溫25°C

5、,流速0?2mL/mino進(jìn)樣量5uLo流動(dòng)相：甲醇一水(67:33)檢測(cè)波長230nm,在此檢測(cè)波長之下理論塔板數(shù)大于2000。分離度符合要求。2.1色譜條件的優(yōu)化2.1.1色譜柱使用SymmetryShie1dTMRP18色譜柱(150mmX3.9mm,ID=5um)得到的色譜圖中峰數(shù)較少，JI峰較寬；換用PhncomncxcLunaC18色譜柱(250mmX4.6mm,ID=5um)后峰數(shù)明顯增多，且峰較尖銳.2.1.2檢測(cè)波測(cè)定樣品溶液的光譜圖，提取從250?350nm的譜圖，結(jié)果表明：在

6、230nm波長為其最適波長。能夠；兼顧各種種生物堿的分離完全且分析方法的靈敏度高，樣品的整個(gè)色譜圖圖形良好.2.1.3柱溫設(shè)置為20°C時(shí)發(fā)現(xiàn)溫度受外界影響較大，基線有時(shí)漂移且重復(fù)性不好;適當(dāng)提高柱溫至25°C能夠克服以上缺陷，基線平穩(wěn)且使分離較好.2.1.4甲醇與水的比例分別釆用了甲醇-水溶液為(50：50)、(62：38)、(67：33)、(70：30)、(75:25)不同比例的流動(dòng)相，分析樣品溶液?結(jié)果表明：甲醇-水溶液比例為67:33時(shí),整個(gè)色譜圖屮大部分峰的峰形和分離度都較好；甲醇比例減

7、小，峰形變寬保留時(shí)間延長并出現(xiàn)大包；甲醇比例增尢峰形變窄保留吋間縮短，且出現(xiàn)部分重疊?故選擇甲醇-水溶液(67:33).2.2核磁法鑒定了其屮的7個(gè)主要成分。見下圖(一)圖(一)成分的化學(xué)式OHOCH3貓眼草黃素Chryssplcnctini-OCH//榊皮力壽菊素Qucrcetagetin-3,7,3，4-teramethylether2貓眼草酚ChqysosplenolD3青蒿酸Artcmisinicacid4圖（一）：1為貓眼草黃素；2為榊皮萬壽菊素；3為貓眼草酚；4為青蒿乙素化合物1：淡黃

8、色結(jié)晶(丙酮),1H-NMR(600MHz,DMS0-d6)5：6*92(1H,s,H-8)、7-66(1H,d,J=2?0Hz,H-2’)、6-94(1H,d,J=8?5Hz,H-5‘)、7?61(1H,dd,J=8?5、2-0Hz,H-6')、12?62(5—OH)、9?95(4‘—OH)、3?91(-0CH3)、3?72(—0CH3)、3?80(—OCH3)、3-86(-0CH3);以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］中發(fā)表的光譜數(shù)據(jù)對(duì)照，基本一致，故鑒定為：貓眼草黃素(chrysoplen