（精品）黃花蒿中黃酮類成分的分離與鑒定研究分析論文（可編輯）

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1、黃花蒿中黃酮類成分的分離與鑒定卜俊恒內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院呼和浩特010059摘要目的:在對(duì)中藥黃花蒿進(jìn)行了活性研究之后建立了一種高效液相色譜-串聯(lián)核磁共振同時(shí)測(cè)定中藥黃花蒿中黃酮類成分的方法.使用PhenomenexLuna,C18色譜柱，流動(dòng)相為甲醇？水溶液67:33,在檢測(cè)波長(zhǎng)230nm下,分離出黃花蒿有效成分組中4個(gè)主要的成分，這些成分分別屬于生物菇類、黃酮類;并采用核磁共振方法鑒定其結(jié)構(gòu)。結(jié)果顯示:本實(shí)驗(yàn)共鑒定出四種成分，分別是:貓眼草黃素?擱皮萬(wàn)壽菊素?貓眼草酚?青蒿酸。對(duì)于上溯有效成分進(jìn)行鑒定，能為更好地闡明中藥黃花蒿的有效成分及作用機(jī)制提供依據(jù)。關(guān)鍵詞黃花蒿

2、;黃酮類化合物；高效液相色譜-串聯(lián)核磁共振黃花篙又名青篙，為菊科植物黃花篙Artemisiaanna的干燥地上部分;具有清熱解暑、除蒸、截瘧等功效［1］。20世紀(jì)70年代我國(guó)學(xué)者［2］從中分離得到的青蒿素，是含有過氧基團(tuán)的倍半菇內(nèi)酯類化合物，治療惡性腦瘧及抗氯唾株瘧疾等疾病具有高效、速效、低毒等特點(diǎn)，是重要的抗瘧藥物［3］o對(duì)于黃花蒿的研究目前主要是從植物中提取分離青蒿素，由于各種黃花蒿中的有效成分含量差別很大，有些含量很低,藥用價(jià)值不大［4］o且如果黃花蒿中的有效成分含量低于5%。,就沒有工業(yè)提取價(jià)值。目前主要的測(cè)定方法有結(jié)晶稱重法、TLC法、HPLC法［3］等

3、，由于青蒿素只有末端吸收，因此需經(jīng)柱前衍生后才能測(cè)定［5］,也有人采用HPLC-ELSD方法測(cè)定［6］。黃花蒿ArtemisiaannuaL.的主要活性成分為青蒿素，含量較低，而其中的某些黃酮類化合物可促進(jìn)青蒿素與血晶素的反，增強(qiáng)青蒿素的抗瘧性。對(duì)于黃花蒿的研究,長(zhǎng)期以來的重點(diǎn)都集中于其抗瘧活性成分青蒿素及其類似物上，對(duì)其中含量較高的黃酮類化合物的研究尚未見報(bào)道。作者提出高效液相色譜-串聯(lián)核磁共振方法，可同吋定性、定量分析青蒿素和黃酮類化合物。1實(shí)驗(yàn)部分1.1儀器與材料高效液相色譜-串聯(lián)核磁共振H木島津?8A二元泵,,核磁共振檢測(cè)器，色譜柱填料:PRC70DS色譜

4、柱內(nèi)徑:2*25cm。藥材自采；甲醇為色譜純;酸度計(jì)DELTA320上海有限公司；純水機(jī):上海醫(yī)療儀器廠水為二次蒸憾水。2樣品處理藥材混合后粉碎，用乙醇?水55:45加熱回流提取3次，殘?jiān)靡掖技訜峄亓魈崛?次，合并提取液，回收溶劑,得到總黃酮。3實(shí)驗(yàn)條件色譜柱2*25cm;柱溫25°C,流速0.2mL/mino進(jìn)樣量5nLo流動(dòng)相：甲醇?水(67:33)檢測(cè)波長(zhǎng)230nm,在此檢測(cè)波長(zhǎng)之下理論塔板數(shù)人于2000o分離度符合要求。2結(jié)果2.1色譜條件的優(yōu)化1.1色譜柱使用SymmetryShieldTMRP18色譜柱150inmX3.9mm,ID5um得到的色譜圖

5、屮峰數(shù)較少，且峰較寬；換用PhneomnexeLunaC18色譜柱250mmX4.6mm,11）5um后峰數(shù)明顯增多，且峰較尖銳.1.2檢測(cè)波測(cè)定樣品溶液的光譜圖,提取從250^350nm的譜圖，結(jié)果表明:在230mn波長(zhǎng)為其最適波長(zhǎng)。能夠;兼顧各種種生物堿的分離完全且分析方法的靈敏度高，樣品的整個(gè)色譜圖圖形良好.2.1.3柱溫設(shè)置為20°C時(shí)發(fā)現(xiàn)溫度受外界影響較大，基線有時(shí)漂移且重復(fù)性不好;適當(dāng)提高柱溫至25°C能夠克服以上缺陷,基線平穩(wěn)且使分離較好.2.1.4甲醇與水的比例分別釆用了甲醇-水溶液為50:50、62:38、67:33、70:30、75:25不同比

6、例的流動(dòng)相,分析樣品溶液?結(jié)果表明：甲醇-水溶液比例為67:33時(shí),整個(gè)色譜圖中大部分峰的峰形和分離度都較好；甲醇比例減小，峰形變寬保留時(shí)間延長(zhǎng)并出現(xiàn)大包；甲醇比例增大，峰形變窄保留時(shí)間縮短，且出現(xiàn)部分重疊?故選擇甲醇-水溶液67:33.2.2核磁法鑒定了其中的7個(gè)主要成分。見下圖（?）圖一成分的化學(xué)式貓眼草黃素Chryssplenetin1榊皮萬(wàn)壽菊素Quercetagetin-3,7,3'4-teramethylether2貓眼草酚ChqysosplenolD3青蒿酸Artemisinicacid4圖(一)：1為貓眼草黃素;2為榊皮萬(wàn)壽菊素:3為貓眼草酚;4為

7、青蒿乙素化合物1:淡黃色結(jié)晶丙酮，1H-NMR600MHz,DMS0-d66:6?921H,s,H-8、7?661H,d,J2?0Hz,2、6?941H,d,J8?5Hz,H-5Z、7?611H,dd,J8?5>2?0Hz,H~6z、12?625-OH、9?954z-OH、3?91-OCH3、3?72?OCH3、3?80?0CH3、3?86?OCH3;以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］中發(fā)表的光譜數(shù)據(jù)對(duì)照，基本一致，故鑒定為：貓眼草黃素(chrysoplenetin)?；衔?:黃色結(jié)晶丙酮,1H-NMR600MHz,CDC135:12?605_0H、5?736-OH、7?72

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