第15章核酸的研究方法

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1、第十五章核酸的研究方法第一節(jié)核酸的分離、提純和定量測定一、DNA的分離用lmol/L的NaCl制備組織勻漿，離心除去組織殘渣，多次用苯酚處理使蛋口質(zhì)變性，每次處理后離心取上層水相，最后加2倍體積的乙醇沉淀lliDNAo二、RNA的分離由于RNA酶存在廣泛，冃十分穩(wěn)定，破碎細胞時要加入弧鹽破壞RNA酶，試劑要用0.1%的DEPC（焦碳酸二乙酯）配制，器川L要高壓火菌或川0.1%的DEPC處理，多次川苯酚或氯仿處理使蛋口質(zhì)變性，每次處理后離心取上層水相，mRNA可用寡聚dT-纖維素親和層析從總RNA中分離。三、核酸含量的測定法常川的方法是測定2

2、60nm的消光度，川公式計算核酸的含暈。核酸的含量也可以用定磷法測定。DNA的含量可以用二苯胺顯色法測定。RNA的含量可以用地衣酚顯色法測定。Sitigle-sirandedDNAAnnealingofprimercreatesashortMrrichdCTPdGTPofdoublc-su

3、TGelclectrophorrxhand^ntnnw1ic?gniplwddClAGACTdcl<；CGAGA(rr1trariioumixturrw-(C~Ikrmnplrinrntkthrnrigmaltrinphte^tr.ind($'?55：—T—C—G~C~A~I—Rruilt;第二節(jié)核酸的超速離心及核

4、酸的凝膠電泳一、核酸的超速離心超速離心口J以分離超螺旋DNA（密度大），線性DNA（密度?。┖烷]環(huán)DNA（密度居中）。也可以分離RNAo二、核酸的凝膠電泳從細菌抽提得到的質(zhì)粒DNA樣品中不含線狀DNA松池憶OC,OpencircularDNAKUkXtD超螺旋.CCCrcovaient)y

5、retchofdouble-stnindeciDNA飛DNA的酶法（末端終止法）測序Singk-ttmruledDNAtobeicqi>cnrodiicupfilvnirrawOtirdNTPiiridiculethxrlylabeledKHHA廠口HHddcrrp(ckiNn1!ddATTddTTP4rrariionmimrrsdd<；TPddl；GAtnA-T-C-G-oXTRcxiingvqurncebottomtotop:—A—Gr-C—G

6、~I—A"G-C—InconiplrmrmhihroriginalirrnplatrstrandiS'f5'):—T-C一G"*C-A?T?C?RcmiIl二、DNA的化學(xué)法測序GA+GC+TCAAT51r-T（：CTGAT（：CCA（；TCTA3*5*AT（：T（；A（XXrrAGTCXT-‘1’3*<>—p-o—oII<>MrthiL*tion5*OUNAfragment(>orop—mio—roRingoprninjiwMha

7、lLaboPipmcianr0L<>hiuVICH,Hv

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