第章核酸的研究方法(精)

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1、第十五章核酸的研究方法第一節(jié)核酸的分離、提純和定量測定一、DNA的分離用lmol/L的NaCl制備組織勻漿，離心除去組織殘渣，多次用苯酚處理使蛋白質(zhì)變性，每次處理后離心取上層水相，最后加2倍體積的乙醇沉淀出DNAo二、RNA的分離由于RNA酶存在廣泛，fl.十分穩(wěn)定，破碎細胞時要加入弧鹽破壞RNA酶，試劑要用0.1%的DEPC（焦碳酸二乙酯）配制，器血要高壓火菌或用0.1%的DEPC處理，多次用苯酚或氯仿處理使蛋白質(zhì)變性，每次處理后離心取上層水和，mRNA可用寡聚dT?纖維素親和層析從總RNA中分離。三、核

2、酸含量的測定法常用的方法是測定260nm的消光度，用公式計算核酸的含雖:。核酸的含量也可以用定磷法測定。DNA的含量可以川二苯胺顯色法測定。RNA的含量可以用地衣酚顯色法測定。Singlc-stranck^lDNAofdoublc-straiidcdDNASingk-strancicdDNAtobetcquciKcdOurdXTPhradioacthtrlv{dAITarrr曲d

3、ductsddATP"IE4rrariionmixturefirkITTPddAG.UTT

4、lAC-RrtulcIIIJ第二節(jié)核酸的超速離心及核酸的凝膠電泳一、核酸的超速離心超速離心可以分離超螺旋DNA（密度人），線性DNA（密度小）和閉環(huán)DNA（密度居屮）。也可以分離RNAo二、核酸的凝膠電泳從細菌抽捉得到的質(zhì)粒DNA樣品小不含線狀DNA松迪怡OC,OpencircularDNA??■?'SUPWCCXED■H趨螺陸CCCrco￥alent)y<]osedcircularDNAL2J第三節(jié)核酸的核昔酸序列測定Single*strandrdDNAATpolvmvfasc+3-OHdATParrpd

5、CTPdGTPTrtAnnealingofprimercreatesashortstretchofdotible-sinmdeclDNA■ioPrimer一、DNA的酶法（末端終止法）測序JJ"WTSingloitraruicclDNAtobeyqueixMPnnirrRrActionproducu?Iir-KiionmiKiurr^ddGAGACTddGCGAGACTdtlGATGCC.AGACT

6、ATGCGAGACTGelrirctrophorrMhandautnrarfiographvLargerfragnwnwRradiiig4q11rnrrbottomti)to卩：?A—G~C?(AT—A—OC?Ikcnmplrinrnii、ihroriginalirrnphir%u

7、ntDkncilnlwHatrOII+H^COSCXH,II(>MriinLaxin-O—P=OT—FOaDV%fragmentHC=<)Thymic()*O—P=O*O—P=oI()PipcridinrQo—p—crIo*5r—P

8、i：urikniwn

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