[精品]產纖維素酶低溫菌株的分離鑒定

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1、產纖維素酶低溫菌株的分離鑒定產纖維素酶低溫菌株的分離鑒定摘耍：為促進秸稈還田，加快秸稈在北方設施土壤中的降解速度，以腐爛秸稈為待篩菌株原料，以玉米秸稈粉為培養(yǎng)基，在15°C低溫條件下，采用剛果紅平板法進行初篩，得到16株菌株，對16株菌株進行酶活測定復篩，其中L-13酶活最高，達1679.61U/mlo對L-13菌株的菌體形態(tài)、菌落特征進行觀察，并進行了一系列生理生化試驗和16SrDNA序列分析，初步鑒定L-13為枯草芽抱桿菌(Bacillussubtilis)o此菌可以在15°C下快速生長繁殖并高產纖維索酶，低溫條件下能快速降解秸稈。關鍵詞

2、：玉米秸稈；低溫；纖維素酶中圖分類號:Q93-331文獻標識號:A文章編號：1001-4942(2014)03-0054-04AbstractinordertopromotestrawreturningandspeedupitsdegradationintheNorthgreenhousesoil,usingrottenstrawasrawmaterialsandcornstrawpowderasmedium,16strainswereisolatedwithCongoRedplatemethodat15°C?Thentheenzymeact

3、ivitiesof16strainsweredetected.L-13hadthehighestenzymeactivityof1679?61U/m1.ThemycelialmorphologyandcolonycharacteristicsofL~13wereobserved,andaseriesofphysiologicalandbiochemicaltestsand16SrDNAsequenceanalysiswereconducted.TheL~13strainwaspreliminarilyidentifiedasBacilluss

4、ubtilis?Owingtogrowingfastlyandhighyieldingofcellulaseat15°C,itcoulddegradethestrawtinderlowtemperaturerapidly.KeywordsCornstraw；Lowtemperature；Cellulase我國的玉米秸稈資源分布較廣，是一種易得的可再生生物資源。目前秸稈的主耍用途是秸稈還田和制備粗飼料，但用量總和不足秸稈總量的40%,其余則被焚燒掉，造成了極大的資源浪費和環(huán)境污染。為了進一步提高秸稈的利用率，加快秸稈的降解速度，尤其是低溫條件下

5、的降解效率，以滿足北方冬季設施秸稈還田的需要，本試驗在低溫（15°C）環(huán)境下，篩選出了玉米秸稈低溫快速腐熟菌，并進行了菌株鑒定，以期為北方冬季設施秸稈還田提供科學依據。1材料與方法1.1材料與試劑1.1.1材料玉米秸稈，采自朝陽市郊區(qū)，粉碎后用于腐熟菌的篩選。1.1.2試劑0.05mol/L醋酸-醋酸鈉緩沖液;3,5-二硝基水楊酸顯色液（DNS）；0.5%竣甲基纖維素鈉溶液；0.2mg/ml纖維素酶;2mol/L鹽酸溶液。1.1.3培養(yǎng)基分離培養(yǎng)基：玉米秸稈粉20g,瓊脂20g,水1000ml,121°C滅菌30min,備用。篩選培養(yǎng)基：剛果

6、紅纖維素鈉培養(yǎng)基，見《微生物學實驗》。液體發(fā)酵培養(yǎng)基：牛肉膏3g,蛋白腺10g,NaCl5g,水1000ml,pH7.0?7.2,121°C滅菌30min,備用。生理生化鑒定培養(yǎng)基及試劑見《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》。1?1?4儀器設備高速冷凍離心機、凝膠成像系統(tǒng)、恒溫水浴鍋、PCR儀、電泳儀、恒溫培養(yǎng)箱、731型分光光度計等。1.2試驗方法1.2.1低溫降解纖維素菌株的分離將腐爛的玉米秸稈（含待篩菌株）粉碎，取0.5g加入49.5ml無菌水，置于振蕩器上振蕩30min,后吸取1ml加入9ml無菌水，以此類推，共稀釋到10~9o吸取0.1ml不同

7、倍數(shù)稀釋液于篩選培養(yǎng)基上，涂平板，15°C低溫條件下培養(yǎng)，直到形成單菌落。1.2.2低溫降解纖維素菌株初篩將所得單菌落分別挑到剛果紅纖維素鈉平板屮，每個平」IIL一種菌株，重復3次，15°C恒溫箱屮倒置培養(yǎng)48ho觀察平板，標記有水解圈的菌株、測量水解圈直徑并記錄試驗結果。1.2.3低溫降解纖維素菌株復篩原樣酶液制備：將初篩所得菌株分別轉接到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，15°C培養(yǎng)48h,取發(fā)酵液1ml于EP管中，10000r/min離心10min,上清液即為原樣酶液。DNS法測酶活力：取3支容量為20.0ml的試管，一支做空白對照，其余2支做平行樣晶

8、管。取1.0ml原樣酶液加入樣品管屮，后向3支試管中分別加入4.0ml預熱至60°C的底物溶液，60°C水浴準確計時20min取出,立即加入1.0ml2.0mol/