71無菌檢查法

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1、<71>無菌檢查（USP29-NF24）?這個(gè)章節(jié)的人部分內(nèi)容都和歐洲藥典或FI本藥典相應(yīng)檢測部分保持一致。有一些不一致的地方已用特殊標(biāo)記（??）注明。?下述步驟被用于檢查藥典中規(guī)定要求無菌的是否滿足其&論中相應(yīng)的無菌要求。供試品的性狀允許時(shí)，可以采丿IJ供試品的無菌檢查中的濛舷磁來檢測。如果薄膜過濾方法不能使用，則采用供試品的無菌檢查'11的直接接莎法進(jìn)行檢測。所有的器具，除了標(biāo)明的無菌器皿外，都采用苣接瀆禪法進(jìn)行檢測°重新檢測的規(guī)定條款見給翩觀辭別冗因?yàn)闊o菌檢測是一項(xiàng)非常嚴(yán)格的操作過程（必須保證無菌操作才能得到一個(gè)準(zhǔn)確的檢測結(jié)果），所以對操作人員進(jìn)行

2、相關(guān)的培訓(xùn)和鑒定是非常重耍的。無菌檢查即在無菌狀態(tài)下實(shí)行。為了達(dá)到這個(gè)狀態(tài)，檢測的環(huán)境必須適合無菌操作。要防止檢驗(yàn)過程中暴銅的微生物受污染。耍對無菌檢驗(yàn)的操作壞境進(jìn)行適當(dāng)?shù)厝訖z測和合適的控制來監(jiān)控。不僅僅通過這些藥典中的步驟就能確保一批產(chǎn)站無菌或已經(jīng)滅菌。確認(rèn)在無菌狀態(tài)下操作或按無菌操作步驟操作則是首先需要的。當(dāng)用藥典中合適的藥典方法檢測產(chǎn)品中出現(xiàn)了微生物污染，其結(jié)果宣判該無菌檢測所需方法無效，甚至是更換了操作步驟得到了不同的結(jié)果。?額外的無菌檢測信息，參見V1211培養(yǎng)基按以下處方制備培養(yǎng)基，或使用按該處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基，其能滿足需氣菌，

3、厭氣菌，霉菌的增殖培養(yǎng)。培養(yǎng)基采用有效的程序滅菌。下面培養(yǎng)基適合用于無菌檢查。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基主耍用于厭氣菌的培養(yǎng)。還用于需氣菌的培養(yǎng)。大豆於腸蛋白汐化物侈弄基適合霉菌和需氣菌的培養(yǎng)。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基L-光胺酸2.5g氯化鈉5.5g/5.0g葡萄糖(C6Hl2O6.H2O)0.75g瓊脂，顆粒狀（含水量不低于15%）5.0g酵母浸出物（可溶于水）15.0g酪蛋白胰酶消化物0.5g疏基乙酸鈉或疏基乙酸酯0.3ml刃天青鈉溶液（1：1000）,現(xiàn)配1.0ml純水1000ml取L-光胺酸，氯化鈉，葡萄糖，酵母浸出物和酪蛋白胰卿消化物混合，加熱直到培養(yǎng)棊

4、被活化。加入疏棊乙酸鈉或疏基乙酸酯，如冇必要，加1N氫氧化鈉，調(diào)節(jié)PH值使滅菌后為7.1±0.2。如盂過濾，加熱培養(yǎng)基不需要煮沸，熱時(shí)濾過濾紙。加入刃天青鈉溶液，混合，馬上分裝至合適容器中，這樣在培養(yǎng)期間最多培養(yǎng)上層基顏色發(fā)生變化。配制后采用有效的程序滅菌，培養(yǎng)基放于無菌密閉容器中，2°?25°儲(chǔ)存，如果上層超過三分之一的培養(yǎng)基變粉紅色，培養(yǎng)基需水浴或蒸汽加熱直到粉紅色消失，迅速冷卻，注意防止沒有滅菌的空氣傳入容器屮。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基歌32.5?！?.5°培養(yǎng)。?選擇性硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基配制與昴N翦酸盤漩體舞養(yǎng)基相同紐分的培養(yǎng)基，但不加瓊脂和刃犬青鈉溶

5、液，滅菌同上，冷卻。滅菌后PH7」土0.2。在厭氧條件下培養(yǎng)。選擇性硫乙醇酸鹽培養(yǎng)釘.32.5?！?.5°培養(yǎng)?！龃蠖狗?酪蛋白消化物培養(yǎng)基酪蛋白胰酶消化物17.0g大豆粉木瓜蛋白酶消化物3.0g氯化鈉5.0g磷酸氫二鉀2.5g葡萄糖(C6H12O6.H2O)2.5/2.3g純水1000ml在純水屮溶解固體，微溫加熱活化培養(yǎng)基。培養(yǎng)基冷至室溫，加1N氫氧化鈉調(diào)PH,調(diào)節(jié)PH值使滅菌后為7.3±().2。濾清，然示分裝入合適的容器，，除非需要馬上使用，放于無菌密閉容器中，2°?25°儲(chǔ)存。?青霉素和頭苞菌素在這無菌檢測培養(yǎng)基被用于供試品的無菌檢査、直接接種

6、法,唸氐硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和大豆務(wù)弱蛋白消化細(xì)養(yǎng)基的配制如下°無菌狀態(tài)下在每個(gè)培養(yǎng)基容器中接種足夠數(shù)量的B-內(nèi)酰胺卿以抑制供試品中大量抗生素的活性，首先通過檢驗(yàn)產(chǎn)品中含青霉素或頭抱菌素的抑菌活力以測定所需要的抑制抗牛?素活性的B■內(nèi)酰胺酶數(shù)量。［筆記一充足的B■內(nèi)酰胺酶培養(yǎng)基也可用于薄膜過濾測試。］在一個(gè)與無菌檢測完全隔離的區(qū)域，確定合適數(shù)暈的B■內(nèi)酰胺酶合并接種至培養(yǎng)基屮,選擇下面殮證試殮中任一種方法，用不到lOOcfu的金黃色葡萄球菌J參見表格H做為挑戰(zhàn)。必須可清楚觀察到被接種的培養(yǎng)基中有典型的微生物生長，用以確定B-內(nèi)酰胺酶的含量是合適的。?表格

7、1.增殖檢測和驗(yàn)證試驗(yàn)中適合使用的微生物菌株?2用籐黃微球菌〈)帰生抱梭菌6ATCC9341)好氧菌金黃色葡萄菌,■ATCC653&CIP4.83,NCTC10788,NCIMB9518人腸菌群ATCC6633,CIP52.62,NCIMB8054銅綠假單胞菌*2■ATCC9027,NCTC1078&CIP82.118厭氧菌牛?砲梭菌■ATCC19404,CIP79.3,NCTC532或ATCC11437莓菌假絲酵母ATCC10231,IP48.72,NCPF3179黑館霉ATCC16404JP1431.83,IMI1490071用人腸埃希菌匕弋替金黃色

8、萄葡球菌(ATCC6633)用不產(chǎn)他子的代替銅綠假單胞菌J0CC84&L)［筆記