無(wú)菌檢查法 無(wú)菌檢查法

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1、無(wú)菌檢查法71無(wú)菌檢查法＜71＞無(wú)菌檢查（USP29-NF24）◆這個(gè)章節(jié)的大部分內(nèi)容都和歐洲藥典或日本藥典相應(yīng)檢測(cè)部分保持一致。有一些不◆◆）注明。◆17一致的地方已用特殊標(biāo)記（下述步驟被用于檢查藥典中規(guī)定要求無(wú)菌的是否滿足其專論中相應(yīng)的無(wú)菌要求。供試品的性狀允許時(shí)，可以采用供試品的無(wú)菌檢查中的薄膜過(guò)濾法來(lái)檢測(cè)。如果薄膜過(guò)濾方法不能使用，則采用供試品的無(wú)菌檢查中的直接接種法進(jìn)行檢測(cè)。所有的器具，除了標(biāo)明的無(wú)菌器皿外，都采用直接接種法進(jìn)行檢測(cè)。重新檢測(cè)的規(guī)定條款見(jiàn)結(jié)果的觀測(cè)和分析。因?yàn)闊o(wú)菌檢測(cè)是一項(xiàng)非常嚴(yán)格的操作過(guò)程（必須保證無(wú)菌操作才能得到一個(gè)準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果），所以對(duì)操作人員進(jìn)行相關(guān)的培

2、訓(xùn)和鑒定是非常重要的。無(wú)菌檢查即在無(wú)菌狀態(tài)下實(shí)行。為了達(dá)到這個(gè)狀態(tài)，檢測(cè)的環(huán)境必須適合無(wú)菌操作。要防止檢驗(yàn)過(guò)程中暴露的微生物受污染。要對(duì)無(wú)菌檢驗(yàn)的操作環(huán)境進(jìn)行適當(dāng)?shù)厝訖z測(cè)和合適的控制來(lái)監(jiān)控。不僅僅通過(guò)這些藥典中的步驟就能確保一批產(chǎn)品無(wú)菌或已經(jīng)滅菌。確認(rèn)在無(wú)菌狀態(tài)下操作或按無(wú)菌操作步驟操作則是首先需要的。當(dāng)用藥典中合適的藥典方法檢測(cè)產(chǎn)品中出現(xiàn)了微生物污染，其結(jié)果宣判該無(wú)菌檢測(cè)所需方法無(wú)效，甚至是更換了操作步驟得到了不同的結(jié)果。額外的無(wú)菌檢測(cè)信息，參見(jiàn)＜1211◆＞滅菌和確保無(wú)菌概略?！?7培養(yǎng)基按以下處方制備培養(yǎng)基，或使用按該處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基，其能滿足需氣菌，厭氣菌，霉菌的增

3、殖培養(yǎng)。培養(yǎng)基采用有效的程序滅菌。下面培養(yǎng)基適合用于無(wú)菌檢查。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基主要用于厭氣菌的培養(yǎng)。還用于需氣菌的培養(yǎng)。大豆粉-酪蛋白消化物培養(yǎng)基適合霉菌和需氣菌的培養(yǎng)。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基取L-光胺酸，氯化鈉，葡萄糖，酵母浸出物和酪蛋白胰酶消化物混合，加熱直到培養(yǎng)基被活化。加入巰基乙酸鈉或巰基乙酸酯，如有必要，加1N氫氧化鈉，調(diào)節(jié)PH值使滅菌后為7.1±0.2。如需過(guò)濾，加熱培養(yǎng)基不需要煮沸，熱時(shí)濾過(guò)濾紙。加入刃天青鈉溶液，混合，馬上分裝至合適容器中，這樣在培養(yǎng)期間最多培養(yǎng)上層基顏色發(fā)生變化。配制后采用有效的程序滅菌，培養(yǎng)基放于無(wú)菌密閉容器中，2°～25°儲(chǔ)存，如果上層超過(guò)三分之一的

4、培養(yǎng)基變粉紅色，培養(yǎng)基需水浴或蒸汽加熱直到粉紅色消失，迅速冷卻，注意防止沒(méi)有滅菌的空氣傳入容器中。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置32.5°±2.5°培養(yǎng)?！暨x擇性硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基配制與硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基相同組分的培養(yǎng)基，但不加瓊脂和刃天青鈉溶液，滅菌同上，冷卻。滅菌后PH7.1±0.2。在厭氧條件下培養(yǎng)。置32.5°±2.5°培養(yǎng)?！舸蠖狗?酪蛋白消化物培養(yǎng)基在純水中溶解固體，微溫加熱活化培養(yǎng)基。培養(yǎng)基冷至室溫，加1N氫氧化鈉調(diào)PH，調(diào)節(jié)PH值使滅菌后為7.3±0.2。濾清，然后分裝入合適的容器，，除非需要馬上使用，放于無(wú)菌密閉容器中，2°～25°儲(chǔ)存。◆17青霉素和頭孢菌素在這無(wú)菌檢測(cè)培養(yǎng)基被

5、用于中，修改基和大豆粉-酪蛋白消化物培養(yǎng)基的配制如下。無(wú)菌狀態(tài)下在每個(gè)培養(yǎng)基容器中接種足夠數(shù)量的β-內(nèi)酰胺酶以抑制供試品中大量抗生素的活性，首先通過(guò)檢驗(yàn)產(chǎn)品中含青霉素或頭孢菌素的抑菌活力以測(cè)定所需要的抑制抗生素活性的β-內(nèi)酰胺酶數(shù)量。[筆記－充足的β-內(nèi)酰胺酶培養(yǎng)基也可用于薄膜過(guò)濾測(cè)試。]在一個(gè)與無(wú)菌檢測(cè)完全隔離的區(qū)域，確定合適數(shù)量的β-內(nèi)酰胺酶合并接種至培養(yǎng)基中，選擇下面驗(yàn)證試驗(yàn)中任一種方法，用不到100cfu的金黃色葡萄球菌（參見(jiàn)表格1）做為挑戰(zhàn)。必須可清楚觀察到被接種的培養(yǎng)基中有典型的微生物生長(zhǎng)，用以確定β-內(nèi)酰胺酶的含量是合適的?！舯砀?.增殖檢測(cè)和驗(yàn)證試驗(yàn)中適合使用的微生物菌株◆

6、1用大腸埃希菌代替金黃色萄葡球菌（ATCC6633）◆用藤黃微球菌（）代替生孢梭菌（ATCC9341）◆用不產(chǎn)孢子的代替銅綠假單胞菌（ATCC8482）◆2◆173[筆記－使用菌種培養(yǎng)保藏技術(shù)（菌種系統(tǒng)），使得用于接種的活性微生物由原來(lái)主要的菌種被轉(zhuǎn)種不超過(guò)5代。]適用性檢查本檢查可在產(chǎn)品的無(wú)菌檢查前或與產(chǎn)品的無(wú)菌檢查同時(shí)進(jìn)行。無(wú)菌性確定每批無(wú)菌培養(yǎng)基無(wú)菌，取一定量培養(yǎng)基在特定的溫度下培養(yǎng)14天。應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。好氧菌，厭氧菌和霉菌的增殖檢測(cè)檢測(cè)每批配置好的培養(yǎng)基，無(wú)論是脫水培養(yǎng)基還是按成分配制◆1合適的微生物菌株◆。在表格1中說(shuō)明。接種小于100cfu生孢梭菌，銅綠假單胞菌，金黃色葡萄球菌于

7、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中培養(yǎng)。接種小于100cfu生孢梭菌培養(yǎng)物至選擇性硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基中培養(yǎng)?！舴謩e接種小于100cfu的黑曲霉，枯草桿菌和假絲酵母于大豆粉-酪蛋白消化物培養(yǎng)基中培養(yǎng)，細(xì)菌培養(yǎng)不超過(guò)3天，霉菌培養(yǎng)不超過(guò)5天。如果可清楚地觀察到有菌生長(zhǎng)，培養(yǎng)基符合規(guī)定。◆◆儲(chǔ)存如果配好的培養(yǎng)基保存于非密閉容器中，一般在1個(gè)月內(nèi)使用，提供了兩周內(nèi)培養(yǎng)基增殖檢測(cè)和顏色符合規(guī)定的檢測(cè)。如果保存在密閉容器中，一般可在1年內(nèi)使用，提