《無(wú)菌檢查法》word版

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1、Ⅱ-ⅪH無(wú)菌檢查法1無(wú)菌檢查法10Ⅱ-ⅪH無(wú)菌檢查法無(wú)菌檢查法系用于檢查藥典要求無(wú)菌的藥品、醫(yī)療器具、原料、輔料及其他品種是否無(wú)菌的一種方法。若供試品符合無(wú)菌檢查法的規(guī)定，僅表明了供試品在該檢驗(yàn)條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。無(wú)菌檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行，其全過(guò)程中必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染。單向流空氣區(qū)、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法》的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。隔離系統(tǒng)按相關(guān)的要求進(jìn)行驗(yàn)

2、證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無(wú)菌檢查的要求。培養(yǎng)基培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基可按以下處方制備，也可使用按該處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。配制后應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在2～25℃、避光的環(huán)境。培養(yǎng)基若保存于非密閉容器中，一般在三周內(nèi)使用；若保存于密閉容器中，一般可在一年內(nèi)使用。·1、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)好氧菌、厭氣菌）酪胨（胰酶水解）15g；氯化鈉2.5g；葡萄糖5g；新配制的0.1%刃天青溶液1.0ml；L-胱氨酸0.5g（或新配制的0.2%亞甲藍(lán)溶液0.5ml）；硫乙醇

3、酸鈉0.5g；瓊脂0.75g（或硫乙醇酸0.3ml）；水1000ml；酵母浸出粉5g除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微溫溶解后，調(diào)節(jié)pH為弱堿性，煮沸，濾清，加入葡萄糖和刃天青溶液，搖勻，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.1±0.2，分裝至適宜的容器中，其裝量與容器高度的比例應(yīng)符合培養(yǎng)結(jié)束后培養(yǎng)基氧化層（粉紅色）不超過(guò)培養(yǎng)基深度的1/2。滅菌。在供試品接種前，培養(yǎng)基氧化層的高度不得超過(guò)培養(yǎng)基深度的1/5，否則，須經(jīng)100℃水浴加熱至粉紅色消失（不超過(guò)20分鐘）迅速冷卻，只限加熱一次，并應(yīng)防止被污染。硫乙醇

4、酸鹽流體培養(yǎng)基置30～35℃培養(yǎng)?！?、改良馬丁培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)真菌）胨5g；磷酸氫二鉀1g；酵母浸出粉2g；硫酸鎂0.5g；葡萄糖20g；水1000ml除葡萄糖外，取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH值約為6.8，煮沸，加入葡萄糖溶解后，搖勻，濾清，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為6.4±0.2，分裝，滅菌。改良馬丁培養(yǎng)基置23～28℃培養(yǎng)。·3、選擇性培養(yǎng)基按上述硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或改良馬丁培養(yǎng)基的處方及制法，在培養(yǎng)基滅菌或使用前加入適量的中和劑或表面活性劑，如對(duì)氨基苯甲酸（用于磺胺類(lèi)供試品）、聚山梨酯80（用

5、于非水溶性供試品）或β-內(nèi)酰胺酶（用于β-內(nèi)酰胺類(lèi)供試品）等。中和劑或表面活性劑的用量應(yīng)通過(guò)驗(yàn)證?！?、營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基胨10g；牛肉浸出粉3.0g；氯化鈉5g；葡萄糖5.0g；水1000ml取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH為弱堿性，煮沸，濾清，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.2±0.2，分裝，滅菌?！?、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基按上述營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基的處方及制法，加入14.0g瓊脂，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.2±0.2，分裝，滅菌。·6、0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基（用于硫酸鏈霉素等抗生素的無(wú)菌檢查）胨10g；葡萄糖5g；氯化

6、鈉5g；牛肉浸出粉3.0g；水1000ml除葡萄糖外取上述成分混合，微溫溶解后，調(diào)節(jié)pH為弱堿性，煮沸，加葡萄糖溶解后，搖勻，濾清，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.2±0.2，分裝，滅菌?！?、改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基按改良馬丁培養(yǎng)基的處方及制法，加入14.0g瓊脂，調(diào)節(jié)PH值使滅菌后為6.4±0.2，分裝，滅菌。培養(yǎng)基的適用性檢查無(wú)菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基等應(yīng)符合培養(yǎng)基的無(wú)菌性檢查及靈敏度檢查的要求。本檢查可在供試品的無(wú)菌檢查前或與供試品的無(wú)菌檢查同時(shí)進(jìn)行。無(wú)菌性檢查每批培養(yǎng)基隨機(jī)不少于5支（

7、瓶），培養(yǎng)14天，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。靈敏度檢查。培養(yǎng)基靈敏度檢查法1.菌種：培養(yǎng)基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過(guò)5代（從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為第0代），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。·金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）[CMCC（B）26003]·銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa）[CMCC（B）10104]·枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）[CMCC（B）63501]·生孢梭菌（Clostridiumsp

8、orogenes）[CMCC（B）64941]·白色念珠菌（Candidaalbicans）[CMCC（F）98001]　·黑曲霉（Aspergillusniger）[CMCC（F）98003]　　　　　　　菌液制備：接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯獲營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，接種生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，30～35℃培養(yǎng)18～24小時(shí)；接種白色念株菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基或改良馬丁培養(yǎng)