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《核酸適體結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)換熒光法檢測黃曲霉毒素B》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、核酸適體結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)換熒光法檢測黃曲霉毒素B1班珺1,2,3謝巖黎基金項(xiàng)目:河南省科技廳科技攻關(guān)項(xiàng)目(162102310084);鄭州市科技局新興產(chǎn)業(yè)研究計(jì)劃項(xiàng)目(20150503)收稿日期:2018-04-02作者簡介:班珺,女,1992年出生,碩士,食品安全檢測技術(shù)*通信作者:謝巖黎,女,1971年出生,教授,食品營養(yǎng)與安全,2*(河南工業(yè)大學(xué)糧油食品學(xué)院1,鄭州450052)(河南省糧油食品安全檢測與控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室2,鄭州450052)(廣西崇左市食品藥品監(jiān)督管理局/崇左市食品藥品檢驗(yàn)所3,崇左532200)
2、摘要基于黃曲霉毒素B1(AflatoxinB1,AFB1)與互補(bǔ)鏈競爭結(jié)合核酸適體的位點(diǎn)使熒光恢復(fù),建立了核酸適體結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)換熒光法檢測AFB1。以PBS為工作液,200nmol/L核酸適體與200nmol/L猝滅鏈反應(yīng)30min后加入AFB1孵育1h,利用熒光分光光度計(jì)檢測到的熒光恢復(fù)程度對(duì)AFB1進(jìn)行定量檢測,可獲得該方法的最佳效果。在優(yōu)化條件下,AFB1檢測濃度范圍為1~300ng/mL,檢出限為0.8ng/mL。對(duì)該檢測方法的特異性進(jìn)行考察,結(jié)果表明該法具有良好的特異性。對(duì)花生、玉米實(shí)際樣品進(jìn)行檢測,回收
3、率在81.1%-108.3%之間。關(guān)鍵詞核酸適體曲霉毒素B1熒光檢測中圖分類號(hào):TS207.3文獻(xiàn)標(biāo)志碼:AAnAptamerStrutureConversionFluorescenceAssayfortheDetectionofAflatoxinB1BANJun1,2,3XIEYanli1,2*(CollegeofFoodScienceandTechnology,HenanUniversityofTechnology1,Zhengzhou450052)(HenanKeyLaboratoryofCereala
4、ndOilFoodSafetyInspectionandControl2,Zhengzhou450052)(FoodandDrugAdministrationofChongzuo,Guangxi/ChongzuoInstituteforFoodandDrugControl3,Chongzuo532200)AbstractAnaptamerstrutureconversionfluorescenceassayforthedetectionofAflatoxinB1wasdevelopedbasedonAFB1c
5、ompetedwithcomplementaryoligonucleotidestobindtoaptamerthatcausefluorescencerecover.AFB1wasdetectedbyfluorescencespectrophotometerthroughthefluorescencerecoveryphenomenonasfollowcondition:PBSastheworkingbuffer,after200nmol/Laptamerreactedwith200nmol/Lquench
6、ingoligonucleotidefor30min,addingAFB1inthedetectionsystemandincubatedfor1h.Undertheoptimumconditions,thelinearrangefortheAFB1concentrationdetectionis1-300ng/mLwithadetectionlimitof0.8ng/mL.Thespecificityofthemethodwasinvestigatedandtheresultshowedthatwasgoo
7、d.Takingpeanutandcornassamplesforrecoverytest,therecoveryratewasbetween81.1%-108.3%.Keywordsaptamer,aflatoxinB1,fluorescence,detection黃曲霉毒素是由黃曲霉、特曲霉以及寄生曲霉等產(chǎn)生的一類含有二氫呋喃環(huán)結(jié)構(gòu)的次生代謝產(chǎn)物[1,2]。在已分離出的20余種黃曲霉毒素中,黃曲霉毒素B1(AflatoxinB1,AFB1)致癌性最強(qiáng),被認(rèn)為是誘發(fā)惡性腫瘤原發(fā)性肝細(xì)胞癌(hepatocel
8、lularcarcinoma,HCC)的主要因素之一[3]。為保障食品安全及人類健康,GB2761-2017[4]對(duì)我國食品中AFB1的限量規(guī)定為:花生、玉米及其制品≤20μg/kg,稻谷、糙米、大米、植物油脂≤10μg/kg,谷物類、豆類、堅(jiān)果類、釀造調(diào)味品≤5μg/kg。長期以來,科研工作者為AFB1的檢測探索了許多方法,常見的傳統(tǒng)方法有薄層色譜法[5]、高效液相色譜法[6]、液質(zhì)聯(lián)用法[7]、