(自改)酶的競爭性抑制作用.ppt

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1、丙二酸對琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制作用P、97生物化學與分子生物學實驗CQMU丙二酸對琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制作用目的：P、97原理：1、概念：丙二酸（I）與琥珀酸（S）結構相似，競爭結合琥珀酸脫氫酶活性中心，抑制酶活性。2、競爭性抑制特點：P、98①Vm不變，Km↑；②E的抑制程度∝[I]/[S]；③[S]足夠大，抑制解除。3、觀察：操作：1、酶提取液的制備2、取試管6支，按表所列步驟操作。3、實驗結果及分析注意事項：一、實驗目的學習和掌握酶競爭性抑制的概念和特點觀察丙二酸對琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制作用二、實驗原理抑制劑和底物的結構相似，可與底物競爭酶的活性中心，阻礙酶-底物復合物的形成。酶

2、的競爭性抑制作用抑制程度取決于抑制劑與酶的相對親和力以及抑制劑與底物濃度的相對比例（[I]/[S]）●Km和Vmax的求法底物濃度曲線是雙曲線?！窀偁幮砸种频膭恿W以1/V對1/[S]作圖HOOC—CH2—CH2—COOHHOOC—CH=CH—COOHFADFADH2MBH2甲烯白（無色）MB甲烯藍（藍色）在無氧條件下，以甲烯藍褪色時間來判斷琥珀酸脫氫酶活性的改變。丙二酸HOOC—CH2—COOH琥珀酸脫氫酶酶活性則甲烯藍褪色時間高低較短延長—三、實驗步驟1.酶提取液的制備處死大白鼠，取出肝、腎、心。制備勻漿液。２.酶促反應及競爭性抑制作用取試管6支，按表所列步驟操作。加液體石蠟以隔絕空氣，

3、37℃水浴保溫。隨時觀察各管，記錄褪色所需時間。3.結果及分析酶提取液中有沒有琥珀酸脫氫酶活性？各管的褪色情況有何區(qū)別？為什么？丙二酸對琥珀酸脫氫酶抑制作用的類型及其特點是什么？本實驗中5號、6號試管的作用是什么？完全褪色所需時間計算各管[I]/[S]654321試管編號各管均在最后加入琥珀酸。并且立即混勻，沿管壁加入石蠟油約0.5cm厚，37℃水浴保溫（不搖動）。隨時觀察記錄褪色所需時間P.99四、注意事項加試劑時看清底物與抑制劑的濃度。注意隨時觀察各管褪色情況。37℃水浴保溫過程中，不能振搖試管，避免甲烯白重新氧化變藍。實驗結束后，一定要洗凈試管內的液體石蠟。Let'sbegin！