竹葉黃酮的分離提取

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1、竹葉黃酮的分離提取、檢測與成分分析姓名：周胤瀟班級:微生物121學號：201201220414摘要：竹葉黃酮(Bamboo-leaf-flavonoid,BLF)是我們于上世紀90年代末創(chuàng)制的一種新型植物黃酮制劑,具有優(yōu)良的抗自由基、抗氧化、抗疲勞、耐缺氧、抗病毒、抗菌、抗炎、降脂、擴冠和免疫增強活性等（1-2）。竹葉總黃酮以其巨大的資源優(yōu)勢和良好的藥理活性將成為一種非常有前途的天然藥物,具有廣闊的開發(fā)前景.本實驗主要對竹葉中黃酮類物質(zhì)的含量用紫外分光法進行測定以及高效液相色譜法對竹葉提取物的成分分析。關(guān)鍵

2、詞：竹葉黃酮類物質(zhì)紫外分光法高效液相色譜法前言竹子為禾本科Poaceae竹亞科Bambusoideae多年生常綠植物，在我國分布很廣，資源十分豐富。竹子在建筑、水利、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用，然而，竹子加工利用后，竹葉卻總是被棄置，造成了極大浪費。近年來的研究發(fā)現(xiàn)竹葉中含有多種活性物質(zhì)，其主要活性物質(zhì)是黃酮類物質(zhì),含量平均在2%,竹葉提取物中的有效成分主要是以葒草苷、異葒草苷、牡荊苷和異牡荊苷為代表的碳苷黃酮和以對香豆酸、綠原酸、咖啡酸和阿魏酸為代表的植物酚酸為主，竹葉黃酮中的功能因子主要是黃酮糖苷和香豆素

3、內(nèi)酯,黃酮類物質(zhì)是一類天然植物成分，具有顯著的生理及藥理活性，黃酮類成分有明顯的抗?jié)?、解痙、抗菌、抗炎、降血脂、鎮(zhèn)痛和雌性激素等生物活性和生理活性作用⑶。實驗?zāi)康模海?）掌握樣品的前處理的方法（2）掌握竹葉黃酮的提取、分離與純化（3）用硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法測定竹葉子中總黃酮（4）采用超高效液相色譜（UPLC）定量分析竹葉中葒草苷、異葒草苷、牡荊苷、異牡荊苷、對香豆酸、綠原酸、咖啡酸、阿魏酸8個特征性成分的量。1實驗材料和儀器1.1實驗材料：竹葉（摘自浙江農(nóng)林大學校園內(nèi)）標準樣品：甲醇（分析純）、乙醇（分

4、析純）、亞硝酸鈉、硝酸鋁、石油醚（分析純）、氫氧化鈉、蘆丁標準品（購自中國藥品生物制品檢定所，純度均大于98%）、去離子水。蘆丁標準溶液：精確稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的蘆丁對照品5.600mg，加入甲醇溶液定容至50mL，配成112ug/mL的蘆丁標準溶液。5%亞硝酸鈉溶液：稱取約5.263g亞硝酸鈉溶解在100mL去離子水，置于4℃冰箱中備用。10%硝酸鋁溶液：稱取約11.111g硝酸鋁溶于100mL去離子水中，置于4℃冰箱中備用1.0mol/L氫氧化鈉溶液：稱取4.000g氫氧化鈉溶于100mL去離子水

5、中，置于4℃冰箱備用。1.2實驗儀器：40目篩高速冷凍離心機、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、紫外分光光度計、微波爐、粉碎機、回流裝置密封袋ACQUITY?UltraPerformanceLC超高效液相色譜系統(tǒng)，包含二元溶劑管理器，樣品管理器，柱溫箱和二陣管陣列檢測器；MicromassQ-TofmicroTM串聯(lián)質(zhì)譜（美國Waters公司）2實驗原理及方法2.1實驗原理：浸提、洗脫原理：根據(jù)相似相溶原理，對所用溶劑按黃酮類化合物的極性來選擇，竹葉中所含的有效活性物質(zhì)主要為黃酮甙類，具有較大的極性和親水性，故可以選擇熱水、甲醇

6、、乙醇、丙酮等溶劑進行浸提。但由于水的極性過大，且易于將蛋白質(zhì)、糖類的易溶于水的成分浸提出來，且水提法提取物存放易發(fā)霉，從而影響黃酮類化合物的提取和分離。故本實驗選用甲醇水溶液作為浸提及洗脫溶劑⑷。2.2工藝流程（5，6，7）新鮮竹葉→洗凈烘干→破碎→過篩（40目）→回流浸提→抽濾→懸蒸→定容→測定吸光度→分析計算2.3實驗步驟2.3.1竹葉處理采集竹葉，，立刻用微波爐進行殺青干燥（微波爐，700W，間隙加熱2~3次，每次60S），將烘干的竹樣用粉碎機粉碎，過40目篩，將濾過的竹樣粉末放入密封袋中密封，放置

7、于-40℃冰箱中儲存?zhèn)溆谩?.3.2竹葉黃酮的提取與純化2.3.2.1竹葉黃酮的提取1.精確稱取竹樣粉末各200.00g。2.加入150mL60%乙醇-水溶液，浸泡30min。3.水浴鍋水溫75℃熱回流提取1h。4.冷卻至室溫，過濾，收集濾液。5.在濾渣中加入50mL60%乙醇進行二次回流30min。6.冷卻至室溫收集濾液，棄濾渣，密封，標號，置于4℃冰箱，備用。2..3.2.2萃取、純化在竹樣粗提取液中加入100mL石油醚進行萃取脫脂脫葉綠素，棄上清液取下沉液，再次加入100mL石油醚進行萃取，重復(fù)2次，

8、將提取液密封保存至4℃冰箱備用。2.3.2.3濃縮干燥將萃取過的竹葉提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將其濃縮干燥，將干燥后的殘渣（黃酮初提物）用60%甲醇定容至100mL容量瓶中，保存于4℃冰箱備用。2.42.3.4離心將竹葉黃酮濃縮液用離心機在轉(zhuǎn)速為4000rpm，溫度10℃條件下離心10min，取上清液，保存至4℃冰箱備用。2.3.3黃酮總含量測定----硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法標準曲線制作：精確稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的蘆