植物生化制藥 第五章 核酸類藥物.ppt

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1、第五章核酸類藥物第一節(jié)概述核酸是以核苷酸為基本組成單位的生物大分子,攜帶和傳遞遺傳信息。98%分布于細(xì)胞核,其余分布于核外如線粒體,葉綠體。主要分布于細(xì)胞質(zhì)(90%),剩余10%位于細(xì)胞核。(deoxyribonucleicacid,DNA)(ribonucleicacid,RNA)脫氧核糖核酸核糖核酸攜帶遺傳信息,決定細(xì)胞和個(gè)體的基因型(genotype)。參與細(xì)胞內(nèi)DNA遺傳信息的表達(dá)。某些病毒RNA也可作為遺傳信息的載體。核酸堿基戊糖核苷磷酸核苷酸核酸類藥物是具有藥用價(jià)值的核酸、核苷酸、核苷以及堿基的統(tǒng)稱。除了天然存在的堿基

2、、核苷、核苷酸外,它們的類似物、衍生物或這些類似物、衍生物的聚合物也屬于核酸藥物。一、RNA的制備(一)材料的選擇與預(yù)處理制備RNA的材料要選擇含核酸量豐富的組織。RNA的含量和細(xì)胞的活躍程度有關(guān),在蛋白質(zhì)合成旺盛的細(xì)胞中,其核酸的含量也相應(yīng)地較高。第二節(jié)核酸類藥物的一般制備方法組織勻漿沉淀物(DNA、蛋白質(zhì)等)上清液(RNA等)殘留物(DNA等)酸提取液(RNA)堿處理酸處理殘留物脂溶性物質(zhì)有機(jī)溶劑處理殘留物酸溶性小分子冷酸處理1.酸處理法將經(jīng)酸和有機(jī)溶劑處理后的殘留物用1mol/L的過(guò)氯酸液于4℃下處理18h,從中抽提出RNA

3、,沉淀部分再用0.5mol/L的過(guò)氯酸液70℃下處理20min提取DNA。此法的缺點(diǎn)是有些材料的DNA在冷過(guò)氯酸抽提時(shí)被少量提取,從而使RNA部分中混有少量的DNA。2.堿處理法將殘留物用1mol/L的NaOH溶液于37℃處理過(guò)夜,則RNA被堿解為堿溶性核苷酸,DNA不溶解。加入過(guò)氯酸或三氯乙酸使溶液酸化,至酸濃度為5%-10%,此時(shí),RNA的分解產(chǎn)物溶解在上清液中,DNA等則被沉淀下來(lái)。此法的優(yōu)點(diǎn)是RNA和DNA分開(kāi)得較為徹底,缺點(diǎn)是RNA中還含有其他含磷化合物,如磷肽,磷酸肌醇等。(二)提取與純化1.提?。?)乙醇沉淀法(2)

4、去污劑處理法(3)酚法2.純化(1)密度梯度離心法(2)柱色譜法(3)凝膠電泳法(三)含量測(cè)定定磷法(1)核酸樣品用硫酸消化,將有機(jī)磷轉(zhuǎn)化成無(wú)機(jī)磷;(2)制定定磷標(biāo)準(zhǔn)曲線;(3)測(cè)定回收率和樣品總磷量。(NH4)MoO4+H2SO4H2MoO4+(NH4)2SO4H3PO4+12H2MoO4H3P(Mo3O10)4+12H2OH3P(Mo3O10)4Mo2O3?MoO3(鉬藍(lán))定糖法Vit?CRNA中的戊核糖可在鹽酸的水解作用下游離出來(lái),進(jìn)一步形成糠醛,然后與地衣酚反應(yīng),反應(yīng)物程鮮綠色,在670nm有最大吸收峰。二、DNA的制備材

5、料的選擇與處理2.提取與純化3.含量測(cè)定(1)定磷法同RNA(2)定糖法又稱二苯胺法,在酸性溶液中,將DNA與二苯胺共熱,形成藍(lán)色化合物,該化合物在595nm有最大吸收。當(dāng)DNA濃度在20-200ug/mL時(shí),光吸收度與DNA濃度呈正比。三、核苷酸、核苷及堿基的制備(一)制備方法1.直接提取法2.水解法(1)酶水解法(2)堿水解法(3)酸水解法3.化學(xué)合成法4.酶合成法5.微生物發(fā)酵法光合磷酸化法制備ATP的工藝流程5′-AMP[溶解,混合]Na2HPO4,Tris,PMS肌激酶,ATP(引子)混合液反應(yīng)液ATP粗制品上清液濾液A

6、TP成品ATP沉淀洗脫液(含ATP)吸附物流出液[光合]葉綠體pH3,1-1.5h[沉淀]三氯乙酸10℃以下[提取]乙醇10℃4-5h[干燥]乙醇,乙醚減壓[去陽(yáng)離子]732樹(shù)脂pH6→1→2[除熱源、沉淀]硅藻土、乙醇[去雜質(zhì)]蒸餾水、硅藻土[洗脫]NaCl溶液pH3.8[吸附]NaOH,717樹(shù)脂pH6.5-7ATP的藥理作用與臨床應(yīng)用在生物體內(nèi),ATP廣泛參與各種生化過(guò)程,除參與核酸形成外,主要起著供應(yīng)能量和磷酸基團(tuán)的作用。ATP除了作為危重病人搶救的輔助藥物外,還可對(duì)慢性肝炎、肝硬化、腎炎、心肌炎、冠狀動(dòng)脈硬化、進(jìn)行性肌肉

7、萎縮、再生障礙性貧血、腦血管意外后遺癥、中心性血管痙攣性視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、耳聾、耳鳴等有一定療效。第五章酶類藥物第一節(jié)概述一、酶類藥物發(fā)展簡(jiǎn)史酶類藥物是直接用各種劑型的酶以改變體內(nèi)酶活力,或改變體內(nèi)某性質(zhì)生物活性物質(zhì)和代謝產(chǎn)物的數(shù)量等,從而達(dá)到治療某些疾病的目的。1926年,Sumner將尿素酶結(jié)晶是藥用酶工業(yè)化的起點(diǎn)。1952年,Innerfield首次將結(jié)晶的胰蛋白酶用于治療血栓性靜脈炎,真正揭開(kāi)了酶在醫(yī)療應(yīng)用的序幕。20世紀(jì)60年代后期,逐漸發(fā)展到從微生物發(fā)酵液中獲得大量的酶。70年代后,開(kāi)始利用人的某些組織細(xì)胞

8、培養(yǎng)技術(shù)和基因工程手段來(lái)獲取有關(guān)的酶,使酶類藥物的應(yīng)用得到了迅速發(fā)展。對(duì)酶類藥物的要求1.藥用酶應(yīng)在生理環(huán)境(pH中性)下具有最高活力和穩(wěn)定性。2.對(duì)其作用的底物具有較高的親和力。3.在血清中半衰期較長(zhǎng)。4.要求純度高,特別是對(duì)注射用的酶類藥物純度

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