[精品]手把手教你使用Imagepro Plus(七) 圖象分析策略.doc

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1、2006-08-0310:26文章來源：丁香園點擊次數(shù)：1127有了圖彖分析軟件，該怎么應(yīng)用它來分析工作中的圖片呢？這就涉及到圖片分析的策略。這并沒有一個權(quán)威的或者是已經(jīng)右定論的方法。因此我在這甲-只能講講我自己作過的一些顯微鏡圖片分析處理的方法。從我自己的體會來說，兒乎每一項分析其策略都不同。我也不敢說自己的作法就是正確的。也沒有多少文獻可供參考。比如免疫紐化染色圖片的圖象分析方法，查過一些文獻,提到圖片的數(shù)字分析處理時往往就兒句話。有許多還是用圖象分析儀測量的。我懷疑他們自己也沒弄明白具體的分析策略是什么。有人是這樣作的：使

2、用正圓形AOIT具，在一張免疫紐化圖片上隨機選取五個位置，分別測量這五個位置上這個正圓形區(qū)域的平均光密度，得到一個平均光密度值與標準差。我認為這樣作是錯誤的。因為這個平均光密度值的真值就是這張圖片整個的平均光密度值。因此只要選一個矩形AOI,大小就是這張圖片的尺寸，其平均光密度值就是剛才那個平均值的真值,沒仃標準差。要作好免疫組化圖片的數(shù)字分析，從拍攝顯微鏡照片時開始就要考慮操作細節(jié)了。作切片時要保證各個切片條件的一致就不說了，在使用數(shù)碼相機拍攝切片照片時得注意什么呢？1?顯微鏡的殼度要前后保持一致。這包括電源的電壓要穩(wěn)定，最好

3、給顯微鏡加穩(wěn)壓電源，光源殼度調(diào)節(jié)在拍攝一組照片的過程中不能動，聚光鏡也不能調(diào)。2數(shù)碼相機不能用自動調(diào)節(jié)設(shè)負，全部用手動設(shè)置。包括曝光時間、變焦、光圈。還右一個很多人都想不到的地方：H動白平衡功能要關(guān)掉。前而的照片中冇兒張看上去背景是淺藍色的，這就是數(shù)碼相機的H動門平衡功能在起作用。因為整個畫而都是黃色的染色，相機就會認為畫而色溫偏低，要進行一下較正，給加點藍色吧。淺藍色背景其光密度打淺黃色的陽性區(qū)域差不多，這樣就給準確測量光密度帶來了更大的誤差。3.拍攝熒光照片時自動曝光所帶來的影響更大。前面冇一張熒光照片，是從木論壇里找出的。

4、這張照片曝光過度了，結(jié)果是最亮的兒個細胞呈現(xiàn)出了黃色，而不是它們木身的紅色或綠色。另外在細胞周囤出現(xiàn)了光暈，給數(shù)字處理時的選色操作帶來了困難。在選収AOI時不易選中準確的細胞界線。4.在拍攝熒光照片時陽性細胞的光強度很大，陰性細胞光強度很弱。如果都用自己曝光拍攝，相機自己調(diào)節(jié)曝光時間，結(jié)果使者在照片上呈現(xiàn)出相同的光強度，這還怎么分析呀？5.在拍攝雙染色熒光切片時，如果要分析兩種熒光各白的光強度，還在用單色CCD分別加各個染料的濾光片分別拍攝其單色照片分別分析比較準確。用彩色相機拍攝時河題會出在同一個位置兩種熒光都冇的地方，在彩色

5、照片上這里會呈現(xiàn)出第三種顏色，數(shù)字照片的格式似乎很難分清這兩種熒光在這里各占多少比例。也許還是舉個例了來討論一下分析策略吧。從宜觀來看這些切片圖彖，處理后切片整體感覺其“黃色”越來越濃。正常組織也仃一點黃色的地方，而陰性對照組織則一點黃色的地方也沒冇。分別測量一下各個照片整體的平均光密度(densitymean)0陰性正常一天三天五天191170175163155看上去用density(mean)測量其平均密度就行，備個片子Z間右差異。可是把各組切片都這么測量一下，問題就來了，別忘了每組有I?來張切片，其光密度值各仃不同，因此進

6、行了統(tǒng)計學(xué)處理后發(fā)現(xiàn)，除陰性組以外，其他各組之間并無顯著性差異。看來簡單地測量整張圖片的densitymean是不行的。下一個招是測量圖片中黃色區(qū)域的累積光密度(IOD)陰性組兒乎沒有黃色區(qū)域，IOD很小。正常組也有黃色區(qū)域，與一天組、三天組Z間，IOD沒有顯著性差異。五天組的實在是太“黃”了，其累積光密度與其他組有顯著差異了。其實圖片中細胞間隙的背景也是有一定光密度的，測量一下，它的密度值與陽性區(qū)域差得還真不太大，這個密度值應(yīng)該被扣去。再加一招，計算每張圖片中的：陽性區(qū)域光密度值?邙H性區(qū)域中陰性部分光密度值)二陽性區(qū)域IOD

7、-C陰性區(qū)域densitymean)X邙H性區(qū)域Area)式中陽性區(qū)域IOD是照片統(tǒng)計數(shù)據(jù)中IOD的SUM值。陰性區(qū)域Densitymean是陰性區(qū)域density(mean)的平均值。陽性區(qū)域Area是Area的SUM值。這冋齊組之間的差異就表現(xiàn)出來了。不過這個策略是否正確，我也不敢較真。這些照片的背景是淺藍色的，說明照片拍得還不夠理想。這種扌II背景的作法是否合適呢？這個主題實際上太復(fù)雜了，太多了。寫不完的。真希望大家學(xué)會了用IPP后把自己T作中的作法也加進來交流交流。我只能到此暫停一下。以后再慢慢增加。