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《番茄果實后熟與葉片衰老相關(guān)的S1WRKY轉(zhuǎn)錄因子功能分析.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、學(xué)校代碼：10564學(xué)號：2013201709分類號：S641.2密級：碩士士學(xué)學(xué)位位論論文文番茄果實后熟與葉片衰老相關(guān)的SlWRKY轉(zhuǎn)錄因子功能分析王璐黃雪梅副教授指導(dǎo)教師：龐學(xué)群教授學(xué)院名稱：園藝學(xué)院專業(yè)名稱：蔬菜學(xué)答辯委員會主席：胡位榮教授中國·廣州2016年6月華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨立進(jìn)行研究所取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全
2、意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。作者簽名：日期：導(dǎo)師簽名：日期：1摘要番茄（Solanumlycopersicum）是典型的呼吸躍變型果實，在后熟過程中發(fā)生了許多重要的生理變化。在激素水平上，伴隨著乙烯的大量合成；在顏色轉(zhuǎn)變上，葉綠素的降解和番茄紅素的合成使番茄果實在外觀上由綠轉(zhuǎn)紅；在果實質(zhì)地上，由于水解酶的作用使果實逐漸軟化。WRKY轉(zhuǎn)錄因子是植物特有的一類轉(zhuǎn)錄因子，已有的研究表明WRKY轉(zhuǎn)錄因子在植物形態(tài)建成、物質(zhì)代謝、生物及非生物脅迫響應(yīng)等過程中發(fā)揮了重要的調(diào)控作用。近年來在擬南芥、水稻等模式植物上的研究已經(jīng)表明WRKY轉(zhuǎn)錄因子
3、參與了對植物葉片衰老的調(diào)控，但對采后果實后熟調(diào)控方面的研究非常罕見。本論文在本課題組的研究基礎(chǔ)上，以番茄為實驗材料，分析了對乙烯產(chǎn)生明顯響應(yīng)的SlWRKY在葉片和果實中的表達(dá)模式、篩選其下游基因、驗證與其互作的蛋白，從多方面進(jìn)一步探討了WRKY轉(zhuǎn)錄因子是否參與了番茄果實后熟階段的調(diào)控。主要研究結(jié)果如下：1、采用熒光定量技術(shù)檢測了9個SlWRKY基因在四個發(fā)育時期的番茄葉片，六個自然成熟時期番茄果實中的實時表達(dá)情況。結(jié)果表明，（1）SlWRKY16、SlWRKY17、SlWRKY22、SlWRKY23、SlWRKY25、SlWRKY31、
4、SlWRKY33、SlWRKY53、SlWRKY54都在葉片初始進(jìn)入衰老狀態(tài)時表達(dá)量最高，其中SlWRKY25、SlWRKY33、SlWRKY54的變化幅度最大，相對幼葉的表達(dá)量升高了160-200倍；（2）SlWRKY16、SlWRKY17、SlWRKY22、SlWRKY23、SlWRKY25、SlWRKY31、SlWRKY33、SlWRKY53、SlWRKY54在番茄果實成熟期都有不同程度的上調(diào)表達(dá)，但具有不同的上調(diào)模式。（3）SlWRKY16、SlWRKY17、SlWRKY23、SlWRKY25表達(dá)量在粉紅期出現(xiàn)峰值，SlWRKY
5、31、SlWRKY33、SlWRKY53、SlWRKY54在全紅期的表達(dá)量達(dá)到峰值。SlWRKY22的表達(dá)量則呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢。2、使用熒光共聚焦顯微鏡觀察融合YFP的重組載體在本氏煙草中的表達(dá)情況，結(jié)果表明：SlWRKY17、SlWRKY22、SlWRKY23、SlWRKY25、SlWRKY31、SlWRKY33、SlWRKY53、SlWRKY54均定位于細(xì)胞核。3、將啟動子活性載體和過表達(dá)載體共同轉(zhuǎn)化煙草葉片，檢測SlWRKYs對衰老相1本論文得到國家重點研究計劃973項目（2013CB127105）的資助。I關(guān)基因啟動子活性的影
6、響，數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示：SlWRKY對SlACO1、SlACO3、SlPAO的啟動子活性沒有產(chǎn)生明顯影響；SlWRKY16、SlWRKY23、SlWRKY33、SlWRKY53使SlPPH啟動子的提高了2-3倍，SlWRKY25使SlPDS的啟動子活性上升了6倍。SlWRKY16、SlWRKY17也使SlPSY1的啟動子活性有2-3倍的提高。SlWRKY16和SlWRKY17的共同作用則表現(xiàn)出對SlPSY1啟動子更加強(qiáng)烈的調(diào)控作用，使其活性提高了接近4倍。4、通過熒光雙分子互補(bǔ)實驗驗證SlWRKYs與轉(zhuǎn)錄因子SlERF2b、SlERF7、
7、SlRIN之間是否存在相互作用。結(jié)果表明，SlERF2b與SlWRKY17、SlWRKY54，SlERF7與SlWRKY17、SlWRKY33，SlRIN與SlWRKY17、SlWRKY53、SlWRKY17與SlWRKY16、SlWRKY54之間均存在蛋白水平的互作關(guān)系。5、對SlWRKY23、SlWRKY53進(jìn)行原核表達(dá)，并純化獲得高純度的蛋白。這些蛋白在體外與包含W-box的核酸探針反應(yīng)，結(jié)果顯示SlWRKY23能夠與SlACO1、SlACO2、SlACO3、SlPAO、SlPDS、SlPG、SlPPH、SlPSY1、SlSGR的
8、啟動子探針發(fā)生體外結(jié)合，而SlWRKY53未發(fā)現(xiàn)與上述其中一探針的結(jié)合。關(guān)鍵詞：番茄；成熟；衰老；轉(zhuǎn)錄因子；WRKYIITheFunctionofWRKYTranscriptionFactorsinFrui
