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1、豬肺中有效生物活性物質的提取、分離與性質研究2012級張曉娟碩士應用化學熊雙麗ClassifiedIndex:U.D.C:SouthwestUniversityofScienceandTechnologyMasterDegreeThesisSeparation,PurificationandActivityResearchofBioactiveSubstancesfromPorcineLungGrade:2012Candidate:ZhangXiaojuanAcademicDegreeAppliedfor:MasterSpec
2、iality:AppliedChemistrySupercisor:Prof.XiongShuangliMay25,2015西南科技大學碩士研究生學位論文第I頁摘要豬肺含有蛋白質、脂肪、維生素B1、維生素B2、磷、鈣、鐵等人體所需的營養(yǎng)物質，但目前大多數豬肺都沒有得到很好的利用，或者以食料的形式零星出售，或者直接丟棄，附加值相當低。開發(fā)利用豬肺不僅能夠增加用于食品、藥品等行業(yè)的原料資源，提高豬肺的綜合利用率，而且能夠有效減少屠宰場廢棄物對周圍生態(tài)環(huán)境的污染，具有良好的經濟和社會效益。本論文以豬肺為原料提取肝素鈉、抗氧化肽和蛋白
3、質，并對這三種物質的相關性質進行分析。主要研究內容及結果如下：(1)肝素鈉的提取、分離與純化。以己糖醛酸提取率為指標，在單因素條件基礎上，通過響應面優(yōu)化分析，得到肝素鈉的最佳工藝條件為：提取溫度53℃，時間4h，pH=8.5，在此條件下，己糖醛酸提取率為5.49%，粗品肝素鈉提取率為0.81%，效價為6.5U/mg，經過沉淀劑除蛋白質、乙醇沉淀，以及DEAE-Sepharosefastflow離子交換柱層析純化得到高純度的肝素鈉，提取率為0.05%，效價為108.3U/mg。(2)肝素鈉性質研究。經瓊脂糖凝膠電泳分析得到純化物
4、與標準-1品的遷移距離和斑點基本一致。紅外圖譜分析純化物在890cm和-1940cm處存在肝素鈉的特征吸收峰。紫外圖譜分析純化物在260nm和280nm處無明顯吸收峰，在207.5nm處有最大吸收峰。核磁共振1波譜分析純化物，在H-NMR中，乙酰氨基葡萄糖的H1出現在δ=5.53處；硫酸化艾杜糖醛酸的H1出現在δ=5.19處；2-硫酸-艾杜糖醛酸（GlcNs6s）的H5出現在δ=4.93處；6-硫酸-N-硫酸-葡萄糖胺（GlcNS6S）的H4出現在δ=3.61處；N-硫酸化氨基葡萄糖的H1出現在δ=3.30處；N-乙酰氨基葡萄
5、糖的甲基出現在δ=2.05處。在13C-NMR中，單元GlcNs6s中的C-2的δ=57.95，而單元IdoA2s中的C-2的δ=75.74，單元IdoA2s中的羰基碳C-6的δ=174.65。(3)抗氧化肽的提取、分離與純化。以DPPH自由基清除率為指標，在單因素條件基礎上，通過響應面優(yōu)化分析得到抗氧化肽的最佳工藝條件為：料液比1:3，水解6h，酶濃度為6500U/g，在此條件下DPPH自由基清除率為66.89%，粗品抗氧化肽提取率為9.78%。經過葡聚糖凝膠SephadexG-50、G-25和G-10分離純化后，得到體西南
6、科技大學碩士研究生學位論文第II頁外抗氧化活性最強的組分C5，其提取率為1.29%，通過液相色譜-質譜聯(lián)用測得C5組分的分子量為452.00Da。(4)抗氧化肽的性質研究。紫外圖譜分析C5組分在224nm處有單一的吸收峰。由掃描電鏡可知，C5組分呈塊狀，表面較為光滑。-1C5組分的紅外圖譜顯示1402cm左右為羧基的彎曲振動吸收峰，是-1-1羧基存在的信號；3427cm是胺基存在的信號，1405cm左右為羥-1基的面內彎曲振動，是羥基存在的信號；1640cm左右為羰基的信號。C5組分清除DPPH自由基、超氧陰離子、ABTS自由
7、基和羥基自由基的EC50分別為0.073mg/mL、0.989mg/mL、0.192mg/mL和1.261mg/mL，金屬螯合能力的EC50為6.505mg/mL。(5)蛋白質的提取與性質研究。以蛋白質提取率為指標，在單因素條件基礎上，通過響應面優(yōu)化分析得到蛋白質的最佳工藝條件為：料液比1:3，提取時間為1.5h，pH=9.7，此時，蛋白質提取率可達8.28%。經紫外光譜分析得到該物質在279nm處有明顯吸收峰。豬肺蛋白質經氨基酸自動分析儀測定，得到其含有十八種氨基酸，主要氨基酸種類為：谷氨酸、亮氨酸、天門冬氨酸、精氨酸和纈氨
8、酸，其中亮氨酸和纈氨酸是人體不能合成的氨基酸。同步熱分析顯示，蛋白質在200℃附近開始發(fā)生降解，到650℃降解基本完成，具有良好的熱穩(wěn)定性。由掃描電鏡可知，蛋白質呈長條形且無規(guī)則卷曲，表面較為光滑。關鍵詞：豬肺肝素鈉抗氧化肽蛋白質分離純化西南科技大學碩士研究生學位論文第III
