資源描述：
《HPLC法測定人血漿中比阿培南濃度及其藥動學探究.doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在工程資料-天天文庫。
1、HPLC法測定人血漿中比阿培南濃度及其藥動學探究［摘要］目的：建立人血漿中比阿培南的高效液相色譜檢測方法。方法：色譜柱為AgilentZORBAXBonus-RP(4.6mmx250mm,5pm);流動相為甲醇和0.03%醋酸水溶液，采用梯度洗脫法；流速為1.00ml/min;檢測波長為300nm,血漿樣品處理選用&輕基口引唏乙酸為內標，采用硫酸鋅沉淀蛋白。結果：比阿培南在0?2~50.0pg/ml范圍內線性良好，HPLC測定定量下限為0.2pg/ml上匕阿培南和內標在血漿的保留時間分別為3.9min和9.7min,出峰迅速。比阿培南濃度分別為0.5
2、、5.0和40.0pg/ml,血漿樣本回收率分別為101.8%.100.8%,100.4%:精密度試驗日內和日間RSD均小于15%，穩(wěn)定性試驗結果表明血漿樣品在樣品處理過程中較穩(wěn)定(RSD2.1.5給藥方法臨床上本品采用的給藥方式為靜脈滴注，故本試驗采用將注射用比阿培南，并用100ml氯化鈉注射液稀釋，靜脈滴注，滴注時間為1.0ho根據說明書,注射用比阿培南的正常臨床治療劑量為靜脈滴注，一次300mg,12h一次。故本試驗采用低劑量組單次靜脈滴注150mg;中劑量組單次靜脈滴注300mg,高劑量組單次靜脈滴注600mg。多次給藥，每次300mg,每日
3、2次。2.1.6樣品采集2.1.6.1單次給藥受試者于試驗前1周和試驗期內均勿飲用酒類和咖啡類飲料，并在試驗開始前一天進入I期臨床試驗病房，晚上統(tǒng)一清淡飲食。受試者給藥間隔依取血速度而定，通常間隔5mino于給藥前Oh、開始給藥后15.0、30.0、45.0、60.0min，給藥結束后0.5、1.0、1.5、2.0、25、3.0、4.0、6.0h取血；受試者取血順序同給藥順序。受試者服藥后應避免劇烈運動，亦不得長時間臥床。2.1.6.2多次給藥中劑量組10名健康受試者在單次給藥結束后，繼續(xù)進行多次給藥，給藥劑量為300mg/次（藥液稀釋方法同單次給藥
4、），每日2次，連續(xù)給藥5d,每次靜脈滴注時間均為1h（第5天只給藥一次b于第2、3、4、5天早給藥前及第5天開始給藥后15.0.30.0.45.0、60.0min，給藥結束后0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、6.0、8.0h前臂靜脈取血，每人4ml,置于肝素試管中，分取血漿,于?209保存待測。受試者服藥后應避免劇烈運動，亦不得長時間臥床。多次給藥后3d對受試者進行體檢復查。2.2實驗結果2.2.1方法專屬性在本實驗所采用的色譜條件下，注射用比阿培南的保留時間為3.9min左右，內標保留時間為9.7min左右。注射用比阿培南和內
5、標峰形良好，無雜峰干擾測定。提示本方法具有較高的特異性，能準確測定血漿中的注射用比阿培南的濃度，靈敏度較高。見圖1o2.2.2標準曲線和線性范圍>z<取1.5ml塑料離心管數支，量取空白血漿200pl,置于離心管中，分別精密加入不同濃度的的比阿培南標準液，旋渦混勻，配成含比阿培南的濃度分別為0.2,0.5、1.0.3.0、10.0,20.0,50.0pg/ml的標準含藥血漿，各血漿含0.1mg/ml內標20pl,按“24.3”項下血漿樣品的處理方法操作，制備一條標準曲線，并同時做空白樣品，進行HPLC-UV分析。記錄色譜圖，計算比阿培南的峰面積As和
6、內標峰面積Ai的比值f（f二As/Aib以峰面積比值f對血藥濃度C作權重回歸計算，得回歸方程:f=0.0019+0.1638C（權重系數w=1/C）,r=0.9990，按上述條件測得比阿培南在血漿中的定量下限為0.2pg/mlo2.2.3精密度與準確度取1.5ml塑料離心管數支，按22.2”血漿中比阿培南標準曲線制備方法制備含比阿培南濃度分別為0.5、5.0、40.0pg/ml的標準含藥血漿（每個濃度做5份樣品）及一條隨行標準曲線，按“21.3”項下血漿樣品的處理方法操作。每天做一批及一條隨行標準曲線，連續(xù)做3d,共3批，每批每個濃度做5份樣品，記錄
7、色譜圖，計算比阿培南峰面積As和內標峰面積Ai的比值f,代入當天的標準曲線求得實測濃度，計算批內和批間精密度。見表1。表1血漿中比阿培南的精密度2.2.4加樣回收率試驗取1.5ml塑料離心管數支，加入空白血漿0.2ml,旋渦混勻，配成含比阿培南的濃度分別為0.5、5.0、40.0pg/ml的標準含藥血漿，計算比阿培南加樣回收率。見表2。表2比阿培南加樣回收率試驗（n二5）2.2.5穩(wěn)定性試驗取新鮮配制的比阿培南儲備液和49放置4d的比阿培南儲備液，以甲醇?水（5:95,V/V）稀釋至5pg/ml,各進行3樣本分析，采用HPLC法測定。內標（5?輕基n
8、弭朵乙酸）儲備液穩(wěn)定性，方法同上，稀釋至10pg/ml,各進行3樣本分析,結果表明，比阿培南和內標的標準溶液
