hplc法測定血漿中奧美拉唑及其人體藥動學(xué)探究

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1、HPLC法測定血漿中奧美拉唑及其人體藥動學(xué)探究【摘要】目的建立測定人血漿中奧美拉唑的HPLC-UV法,測定健康志愿者口服奧美拉唑腸溶膠囊20mg后的藥代動力學(xué)參數(shù),并評價其與參比制劑的生物等效性。方法以乙醚提取血漿樣品中的奧美拉唑,進行HPLC分析,20名健康志愿者交叉口服奧美拉唑腸溶膠囊試驗和參比制劑20mg,用HPLC法測定血藥濃度,計算主要藥代動力學(xué)參數(shù)及相對生物利用度,以判斷其生物等效性。結(jié)果在3.924～1962ng/ml范圍內(nèi)奧美拉唑與內(nèi)標的峰面積比值與濃度呈良好的線性關(guān)系,以AUC0-12計算的供試制劑相對生物利用度為(99.4±13.8)%,受試奧美

2、拉唑腸溶膠囊的相對生物利用度(99.4±13.8)%。結(jié)論本文所建立的HPLC分析方法靈敏、準確、簡便,臨床實驗的藥動學(xué)統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明兩種奧美拉唑膠囊生物等效。【關(guān)鍵詞】奧美拉唑;藥代動力學(xué);高效液相色譜法本實驗通過測定血漿中奧美拉唑的濃度觀察中國健康志愿者口服浙江雙偉制藥有限公司仿制的奧美拉唑腸溶膠囊(受試制劑)后的血藥濃度經(jīng)時過程,估算其相應(yīng)的藥代動力學(xué)參數(shù),并以阿斯利康制藥有限公司生產(chǎn)的奧美拉唑腸溶膠囊(洛賽克)為參比制劑,估算受試制劑的相對生物利用度,為臨床用藥提供參考。91實驗材料1.1儀器Agilent1100液相色譜儀,含:雙高壓泵,自動進樣器(帶溫控系

3、統(tǒng)),柱溫箱,紫外檢測器。色譜工作站:AgilentChemstation(A.10.02)。TGL-16B高速離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠);旋渦振蕩混和器(上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠)。1.2藥品和試劑奧美拉唑?qū)φ掌酚烧憬∷幤窓z定所標化,含量99.7%;尼美舒利對照品由浙江雙偉制藥有限公司提供,含量99.6%。奧美拉唑腸溶膠囊(浙江雙偉制藥有限公司,批號040320,20mg/粒,受試制劑)。奧美拉唑腸溶膠囊(洛塞克)(阿斯利康制藥有限公司,批號0411005,20mg/粒,參比制劑)。甲醇(色譜純,德國Merck公司);乙酸銨、冰乙酸、三乙胺為分析純;水為去離子純凈水

4、。2實驗方法2.1色譜條件色譜柱:LichrospherODS(25cm×4.6mm,淮陰漢邦科技有限公司);流動相:水(1%的冰醋酸+1%三乙胺)-甲醇(37?∶?63,V/V),流速:1.0ml/min,柱溫:30℃,進樣器控制溫度:5℃,檢測波長:302nm;進樣量:10l。2.2血漿樣品的處理于10ml離心管中精密加入內(nèi)標溶液(10.52μg/ml尼美舒利甲醇溶液)50μl,以氮氣流吹干,精密加入血漿樣品1ml,旋渦3秒混勻,加入69ml乙醚,渦旋4min,于4000r/min離心10min,吸取有機相轉(zhuǎn)移至另一10ml玻璃離心管中,于室溫中氮氣流吹干,加入

5、流動相100μl溶解殘渣,于16000r/min離心2min,吸取上清液轉(zhuǎn)移至自動進樣器樣品管中,進行HPLC分析。2.3數(shù)據(jù)分析將所得血藥濃度-時間數(shù)據(jù)經(jīng)自然對數(shù)轉(zhuǎn)換后,用最小二乘法對尾段相回歸計算消除速率常數(shù)k,C?max?及T?max?均為實測值;消除半衰期(t?1/2?)、曲線下面積(AUC)分別按下列各式估算:t?1/2?=0.693/k,AUC?0-96?=∑Ci+C?i-1?)•(ti-t｝)/2,AUC?0-∞?=AUC?0-96?+C?96?/k,其中C96為最后取樣點濃度,k為末端消除速率常數(shù)。所得參數(shù)(T?max?、C?max?、A

6、UC?0-12?、AUC?0-∞?)用交叉試驗設(shè)計的方差分析,其中C?max?、AUC?0-12?、AUC?0-∞?經(jīng)自然對數(shù)轉(zhuǎn)換后先進行方差分析,然后進行雙單側(cè)t檢驗(顯著性水平α=0.05)。3實驗結(jié)果3.1色譜行為及方法的專屬性在本實驗所采用的HPLC-UV條件下,奧美拉唑出峰時間在6.6min左右,內(nèi)標出峰時間在9.5min左右。奧美拉唑和內(nèi)標峰形良好,無雜峰干擾測定。本方法具有較高的特異性,能準確測定血漿中的奧美拉唑的濃度。93.2血漿中奧美拉唑標準曲線制備及靈敏度取10ml玻璃離心管數(shù)支,分別精密加入不同量的奧美拉唑標準液,加入空白血漿1ml,渦旋混勻,

7、配成含奧美拉唑分別為3.924、9.810、29.43、98.10、196.2、490.5、981.0、1962ng/ml的標準血漿,按“2.2”項下操作,計算奧美拉唑峰面積As和內(nèi)標峰面積Ai的比值f(f=As/Ai),以f值對血藥濃度(C)作權(quán)重回歸計算,得回歸方程。不同5d,每天做一條標準曲線,以f值的平均值對血藥濃度(C)作回歸計算,得回歸方程:f=0.0021756×C+0.0002889(權(quán)重系數(shù)w=1/C,r=0.9998),按上述條件測得奧美拉唑在血漿中的最低定量限為3.924ng/ml(S/N≈10)。3.3回收率試驗(絕對回收率)取10ml玻