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1、一、啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)啟動(dòng)子:位于結(jié)構(gòu)基因5’端上游、能夠指導(dǎo)RNA聚合酶同模板正確結(jié)合、啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄的一段DNA序列。啟動(dòng)子區(qū)增強(qiáng)子區(qū)結(jié)構(gòu)基因真核啟動(dòng)子比原核更復(fù)雜、序列也更長(zhǎng),它不像原核啟動(dòng)子那樣有明顯共同一致的序列,而且單靠RNA聚合酶難以起動(dòng)轉(zhuǎn)錄,而是需要多種蛋白質(zhì)因子的相互協(xié)調(diào)作用。不同真核啟動(dòng)子之間大小、序列很不相同。不同物種的啟動(dòng)子有時(shí)不能互用,如動(dòng)物和植物之間。真核啟動(dòng)子中包含了許多調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄的元件,它們控制著基因表達(dá)的強(qiáng)弱或者時(shí)空差異。根據(jù)對(duì)基因表達(dá)的必須性,這些元件分為2類:核心啟動(dòng)子元件和上游啟動(dòng)子元件(1)TATA框(TATAbox):位于5′端轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上
2、游約20-30個(gè)核苷酸的地方。TATA框是一個(gè)短的核苷酸序列,其堿基順序?yàn)門ATAATAA。TATA框是RNA聚合酶的重要的接觸點(diǎn),它能夠使酶準(zhǔn)確地識(shí)別轉(zhuǎn)錄的起始點(diǎn)并開始轉(zhuǎn)錄。當(dāng)TATA框中的堿基順序有所改變時(shí),mRNA的轉(zhuǎn)錄就會(huì)從不正常的位置開始。(2)CAAT框(CAATbox):位于5′端轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游約70-80個(gè)核苷酸的地方。CAAT框是啟動(dòng)子中另一個(gè)短的核苷酸序列,其堿基順序?yàn)镚GCTCAATCT。CAAT框是RNA聚合酶的另一個(gè)結(jié)合點(diǎn),一般認(rèn)為它控制著轉(zhuǎn)錄的起始頻率,而不影響轉(zhuǎn)錄的起始點(diǎn)。當(dāng)這段順序被改變后,mRNA的形成量會(huì)明顯減少。1.核心啟動(dòng)子元件(corep
3、romoterelement):指RNA聚合酶起始轉(zhuǎn)錄所必需的最小的DNA序列,包括TATA盒和CAAT盒。核心元件單獨(dú)起作用時(shí)只能確定轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)和產(chǎn)生基礎(chǔ)水平的轉(zhuǎn)錄。11281tttcccgccttcagtttagcttcatggagtcaaagattcaaatagaggacctaacagaac11341tcgccgtaaagactggcgaacagttcatacagagtctcttacgactcaatgacaagaaga11401aaatcttcgtcaacatggtggagcacgacacacttgtctactccaaaaatatcaaagata11461cagtctca
4、gaagaccaaagggcaattgagacttttcaacaaagggtaatatccggaaacc11521tcctcggattccattgcccagctatctgtcactttattgtgaagatagtggaaaaggaag11581gtggctcctacaaatgccatcattgcgataaaggaaaggccatcgttgaagatgcctctg11641ccgacagtggtcccaaagatggacccccacccacgaggagcatcgtggaaaaagaagacg11701ttccaaccacgtcttcaaagcaagtggattgatgtgatatc
5、tccactgacgtaagggatg11761acgcacaatcccactatccttcgcaagacccttcctctatataaggaagttcatttcatt11821tggagagaacacgggggactcttgac花椰菜花葉病毒35S啟動(dòng)子=CaMV35S啟動(dòng)子TATA框(TATAbox)CAAT框(CAATbox)2.上游啟動(dòng)子元件(upstreampromoterelement):包括通常位于-70bp附近的CAAT盒和GC盒、以及距轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)更遠(yuǎn)的上游元件。這些元件與相應(yīng)的蛋白因子結(jié)合能提高或改變轉(zhuǎn)錄效率。不同基因具有不同的上游啟動(dòng)子元件,其位置也不相同,這
6、使得不同的基因表達(dá)分別有不同的時(shí)間與空間表達(dá)調(diào)控。這些上游啟動(dòng)子元件中,最普遍的是增強(qiáng)子元件。3.增強(qiáng)子(enhancer)是一種能夠提高同一條DNA鏈上基因轉(zhuǎn)錄效率的順式調(diào)控元件。最早是在SV40病毒中發(fā)現(xiàn)的長(zhǎng)約200bp的一段DNA,可使旁側(cè)的基因轉(zhuǎn)錄提高100倍,其后在多種真核生物和原核生物中都發(fā)現(xiàn)了增強(qiáng)子。增強(qiáng)子通常長(zhǎng)100-200bp,也和啟動(dòng)子一樣由若干組件構(gòu)成,基本核心組件常為8-12bp,可以單拷貝或多拷貝串連形式存在。增強(qiáng)子的作用有以下特點(diǎn):①增強(qiáng)子可以遠(yuǎn)距離作用。通??删嚯x1-4kb、個(gè)別情況下離開所調(diào)控的基因30kb仍能發(fā)揮作用,而且在基因的上游或下游都能
7、起作用。②增強(qiáng)子作用與其序列的正反方向無關(guān)。將增強(qiáng)子方向倒置依然能起作用。而將啟動(dòng)子倒就不能起作用,可見增強(qiáng)子與啟動(dòng)子是很不相同的。③增強(qiáng)子要有啟動(dòng)子才能發(fā)揮作用。沒有啟動(dòng)子存在,增強(qiáng)子單獨(dú)不能表現(xiàn)活性。④增強(qiáng)子對(duì)啟動(dòng)子沒有嚴(yán)格的專一性。同一增強(qiáng)子可以影響不同類型啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄。例如當(dāng)含有增強(qiáng)子的病毒基因組整合入宿主細(xì)胞基因組時(shí),能夠增強(qiáng)整合區(qū)附近宿主某些基因的轉(zhuǎn)錄;當(dāng)增強(qiáng)子隨某些染色體段落移位時(shí),也能提高移到的新位置周圍基因的轉(zhuǎn)錄。帶增強(qiáng)子的35S啟動(dòng)子4.靜止子(silence