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《實驗八_酵母RNA的提取與成分鑒定(濃鹽法).ppt》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、實驗八酵母RNA的提取及 成分鑒定（濃鹽法）實驗?zāi)康恼莆諠恹}法提純RNA的基本原理和方法了解RNA成分鑒定的原理及其方法實驗原理核酸的分類與分布DNA：主要存在于細(xì)胞核的染色體中,線粒體、葉綠體、質(zhì)粒有少量RNA：存在于細(xì)胞質(zhì)中樣本的選擇：酵母RNA（RNA占干重的3%-10%）制備方法：稀堿法、濃鹽法破碎細(xì)胞提取純化I.材料準(zhǔn)備II.破碎細(xì)胞或包膜－內(nèi)容物釋放III.核酸分離、純化IV.沉淀或吸附核酸，并去除雜質(zhì)V.核酸溶解在適量緩沖液或水中制備過程：RNA以可溶性鈉鹽的形式游離析出離心去除菌體,收集上清液,調(diào)至RNA的等電點（pH2～2.5）使RNA沉
2、淀析出，離心收集沉淀乙醚洗滌沉淀、去除雜質(zhì)、提純RNA濃鹽加熱使酵母細(xì)胞壁破裂，蛋白質(zhì)變性沉淀RNA提取方法(濃鹽法)RNA成分鑒定RNA在強酸性條件下沸水浴加熱可以水解：1.磷酸鑒定通過鑒定RNA的三種水解產(chǎn)物來鑒定RNA:鉬酸銨磷鉬酸+FeSO4鉬藍(lán)（藍(lán)色）2.堿基(嘌呤)鑒定3.核糖鑒定5-甲基間苯二酚（藍(lán)綠色）糠醛儀器試劑儀器精密pH試紙（pH0.5～5.0）、廣泛pH試紙（pH1～14）、冰塊、錐形瓶、離心機、天平、電爐干酵母、10％NaCl、6MHCl、冰塊、5％氨水、(NH4)2MoO4試劑實驗操作酵母RNA提取（4人一組）1.酵母破壁：10
3、％NaCl(40mL)100mL錐形瓶煮沸加入干酵母（一勺）沸水浴40min取出冷卻玻棒攪勻取出錐形瓶自來水冷卻后轉(zhuǎn)入50mL離心管3500rpm離心5min取上清2.離心分離RNA兩兩平衡后對稱放入離心機中3.沉淀提純RNA將上清液轉(zhuǎn)入小燒杯中（不可帶入沉淀）冰浴中冷卻用6MHCL調(diào)pH值至2.0～2.5(RNA等電點)冰浴中靜置5-10min（可見燒杯底部有大量沉淀）輕輕搖勻后轉(zhuǎn)入離心管，兩兩平衡后對稱放入離心機3500rpm離心5min，并收集沉淀精密試紙如何調(diào)pH值？2.0RNA成分鑒定溶解RNA2.水解RNA（此處開始2人一組）加22d1.5MH
4、2SO4沸水浴10min取5mlRNA至大試管溶液澄清加1d蒸餾水?dāng)嚦珊隣罴?0ml蒸餾水?dāng)噭蚣?%氨水至pH6-7，繼續(xù)滴加至沉淀完全溶解廣泛試紙核糖鑒定：20d水解液+20dFe3+·HCL+2d5%的5-甲基間苯二酚3.RNA成分鑒定嘌呤鑒定：20d水解液+20d0.1molAgNO3磷酸鑒定：20d水解液+20d鉬酸銨+FeSO4結(jié)晶粉加濃氨水至沉淀消失+10d濃氨水沸水浴15min搖勻沸水浴2min沸水浴2-3min？？？（綠豆大?。╇x心機的使用方法1.選擇合適的離心管2.使用天平對所離心樣本（包括離心套筒）稱量配平3.打開離心機電源，設(shè)定離心速
5、度和離心時間4.按“停止”鍵打開離心機蓋子，將樣本按中心對稱放置5.蓋緊蓋子，按“離心”鍵啟動離心6.離心結(jié)束后，待儀器完全停止轉(zhuǎn)動后方可打開蓋子取出離心管實驗結(jié)果1231號：磷酸鑒定（藍(lán)色）2號：堿基鑒定（紅棕色）3號：核糖鑒定（藍(lán)綠色）思考題在酵母破壁時為什么只能水煮沸了以后再放入裝有酵母和10%NaCl的三角瓶？本實驗中兩次調(diào)pH值的目的分別是什么？實驗九酶法測血糖預(yù)習(xí)知識回顧KnowledgeReview祝您成功！
