pH和鹽對秘魯魷魚肌原纖維蛋白溶解度和構(gòu)象變化的研究.pdf

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1、萬方數(shù)據(jù)DissertationSubmittedtoZhejiangGongshangUniversityforMaster’SDegreeofEngineeringTHEEFFECTSOFpHANDSALT0NTHESOLUBILITYANDCONFORMATIONOFMYOFIBRILLARPROTEINEXTRACTEDFROM阿MBOSQUID(DD^S!j【2WC【靨G五G么$Author：RuiZhangMajor：FoodScienceandEngineeringSupervisor：ProfessorShaoping

2、DengMay2016CollegeofFoodScienceandBiotechnology，ZhejiangGongshangUniversityHangzhou，310035，China萬方數(shù)據(jù)浙江工商大學(xué)碩士學(xué)位論文pH和鹽對秘魯魷魚肌原纖維蛋白溶解度和構(gòu)象變化的研究摘要lllllIIlllIIIII1111111111111111filllY3103423魚糜制品食用方便、口感好、營養(yǎng)豐富，深受消費(fèi)者喜愛，但其制作原料卻在快速枯竭。由于秘魯魷魚營養(yǎng)價值高，價格低，而成為海產(chǎn)品加工的一個重要的功能性原料。但由于其體內(nèi)含水量高、

3、自身含有蛋白分解酶，使得它在魚糜行業(yè)中的使用受到了很大的制約。如何提高秘魯魷魚的凝膠性能，特別是提高肌原纖維蛋白的凝膠性能，是秘魯魷魚加工業(yè)亟待解決的關(guān)鍵問題。研究表明蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象對產(chǎn)品的功效起著非常重要的作用，而且魷魚蛋白的溶解度和空間構(gòu)象均能夠影響其凝膠性能。本文以秘魯魷魚肌原纖維蛋白作為研究對象，研究了pH和鹽(不同種類和濃度條件下)對含有超分子結(jié)構(gòu)的蛋白溶液溶解度和空間構(gòu)象的影響，旨在建立蛋白溶解度和蛋白分子空間構(gòu)象變化與凝膠性能之間的內(nèi)在聯(lián)系，為更好的開發(fā)利用秘魯魷魚資源提供一定的理論基礎(chǔ)。利用紫外光譜、熒光光譜、差示掃

4、描量熱儀(DSC)和光散射分析儀等技術(shù)手段研究了稀釋對蛋白溶液中顆粒的影響，發(fā)現(xiàn)這一過程會導(dǎo)致蛋白顆粒的結(jié)構(gòu)變化。由于在此過程中僅僅蛋白濃度發(fā)生變化，而pH、溫度和鹽濃度均嚴(yán)格保持不變，所以，我們推測秘魯魷魚肌原纖維蛋白溶液萬方數(shù)據(jù)浙江工商大學(xué)碩士學(xué)位論文中存在超分子結(jié)構(gòu)。利用KW．protein804凝膠柱，通過分子排阻色譜與激光光散射聯(lián)用技術(shù)，研究了蛋白不同組分的洗脫峰，證明了溶液中確實(shí)存在超分子結(jié)構(gòu)，且其表觀分子量為(5．865士0．177)x1069／mol。然后將蛋白溶解在不同鹽溶液中，利用上述高效液相色譜技術(shù)證明這個超分子

5、結(jié)構(gòu)在NaCl、NH4C1和CH3COONa溶液中也均存在，但不同鹽離子溶液中此超分子結(jié)構(gòu)略有差異。這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明此超分子結(jié)構(gòu)不是肌原纖維蛋白溶解后再形成的，而很有可能來自于固態(tài)肌肉纖維，靜電相互作用是蛋白質(zhì)分子之間形成超分子結(jié)構(gòu)的驅(qū)動力之一。再次，通過紫外分光光度計和SDS電泳儀，探討了pH和鹽對肌原纖維蛋白溶液溶解度和組分的影響。結(jié)果表明在KCl、NaCl、CH，COONa、NH4C1一價鹽溶液中，和CaCl2、MgCl2、MgS04二價鹽溶液中，肌原纖維蛋白溶解度均是隨著鹽濃度的增高，先增大后減小，在0．5mol／L鹽濃度時蛋

6、白溶解度達(dá)到最高值。溶液的pH在等電點(diǎn)附近時，蛋白溶解度較低，隨著pH偏離等電點(diǎn)，溶解度逐漸增大。不同種類的鹽對蛋白的影響遵循Hofmeister序列，使得蛋白在鹽溶液中的溶解度關(guān)系為NaCl>NH4C1>CH3COONa；CaCl2>MgCl2>MgS04。通過SDS電泳得出，蛋白溶解在不同的鹽溶液中，蛋白組分發(fā)生了一些變化，尤其是肌球蛋白重鏈和肌動蛋白含量變化較為明顯。II萬方數(shù)據(jù)浙江工商大學(xué)碩士學(xué)位論文利用光散射儀、圓二色譜(CD)儀和紫外光譜儀等技術(shù)手段，研究了不同鹽和pH對蛋白分子空間構(gòu)象的影響。通過激光光散射儀的動-靜態(tài)測

7、量技術(shù)，得出不同條件下蛋白溶液的衰減時間、第二維力系數(shù)(A2)和均方旋轉(zhuǎn)半徑(R2)、水力學(xué)半徑(Rh)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同的鹽和pH對蛋白分子間的相互作用力產(chǎn)生了不同的影響，隨著鹽濃度的增大，A2(A2

8、量較少；而蛋白溶解在NaCl、MgCl2中的p折疊含量相對較高，熱穩(wěn)定性相對較好。蛋白在KCl、CH3COONa、MgCl2溶液中的最大紫外吸收波長相對于其它鹽溶液發(fā)生了紅移，使蛋白溶解在這三種溶液中氨基酸殘基移向了更加