微免實(shí)驗(yàn)二匯編ppt課件.ppt

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1、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容錄像：淋轉(zhuǎn)、E花環(huán)介紹：免疫學(xué)檢測技術(shù)（書229）示教：淋轉(zhuǎn)、E花環(huán)單擴(kuò)、雙擴(kuò)、火箭電泳操作：對流免疫電泳、玻片凝集1淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)轉(zhuǎn)化百分率正常值為70%左右分裂相：即染色體型母細(xì)胞：大4-5倍；核質(zhì)疏松，有1-3個(gè)核仁；核周透明區(qū)；胞漿有空泡過渡型：略大；核質(zhì)略疏松；著色較淡小淋巴細(xì)胞：核質(zhì)致密；著色深；胞漿少示教片2E玫瑰花環(huán)試驗(yàn)T細(xì)胞表面有綿羊紅細(xì)胞受體，可在自然情況下與綿羊紅細(xì)胞結(jié)合，形成E玫瑰花環(huán)，由此可區(qū)分T淋巴細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞。示教片3一、抗原抗體反應(yīng)的原理1、基礎(chǔ)：抗原決定簇——抗體的互補(bǔ)決定區(qū)2、特點(diǎn)：特異性可逆性比例性

2、階段性4二、抗原抗體反應(yīng)的影響因素1、電解質(zhì)2、溫度3、酸堿度5三、抗原或抗體的檢測方法凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、免疫標(biāo)記技術(shù)6凝集反應(yīng)概念：抗原+抗體凝集團(tuán)塊直接凝集：顆粒性抗原+抗體凝集團(tuán)塊玻片法、試管法7間接凝集：可溶性抗原包被于載體+抗體凝集團(tuán)塊反向間接凝集：抗體包被于載體+抗原凝集團(tuán)塊協(xié)同凝集：抗體結(jié)合金葡菌SPA+抗原凝集團(tuán)塊89沉淀反應(yīng)概念：可溶性抗原+抗體沉淀物單向瓊脂擴(kuò)散、火箭電泳：抗原定量試驗(yàn)抗體瓊脂板、抗原擴(kuò)散（自由、定向）雙向瓊脂擴(kuò)散、對流免疫電泳：抗原分析、抗原定性試驗(yàn)等抗原、抗體同時(shí)擴(kuò)散（自由、定向）10單向瓊脂擴(kuò)散單向瓊脂擴(kuò)散

3、試驗(yàn)是一種定量試驗(yàn)。將一定量已知抗體混于瓊脂中，制板，在適當(dāng)位置打孔，將抗原加入孔中擴(kuò)散，與板中抗體相遇，在比例合適處呈現(xiàn)白色沉淀環(huán)，環(huán)的直徑與抗原含量成正比。主要用于測定血清各種Ig和補(bǔ)體成分的含量1112單向定量免疫電泳（火箭電泳）將一定量已知抗體混于瓊脂中，制板，在板的一端打一排小孔，加入待檢樣品，置于陰極端進(jìn)行電泳?？乖谟緞?dòng)過程中與抗體在比例合適部位形成錐形沉淀峰，狀如火箭，稱火箭電泳。沉淀峰的高低與抗原的濃度成正比。敏感度與單擴(kuò)相仿，但需時(shí)較短。1314雙向瓊脂擴(kuò)散在瓊脂板上打孔，抗原和抗體分別加到相應(yīng)孔中，二者自由向四周擴(kuò)散，在比例合適

4、處形成沉淀線。若同時(shí)含有若干對抗原抗體系統(tǒng)，可出現(xiàn)多條沉淀線?？捎糜诜治龊丸b定標(biāo)本中多種抗原成分1516對流免疫電泳材料電泳儀緩沖液瓊脂板1塊/2人，打孔器2個(gè)/組，抗AFP血清——已知AbAFP陽性血清——陽性Ag對照陰性血清——陰性Ag待檢血清：標(biāo)本1——未知Ag標(biāo)本2——未知Ag17對流免疫電泳打孔：金屬打孔器打兩排孔，抗原孔與抗體孔間距離為4毫米至5毫米。加樣：抗AFP血清加于抗體孔內(nèi)；病人血清、AFP陽性血清、陰性對照血清分別加于抗原孔內(nèi)。電泳：將瓊脂板置電泳槽，抗原孔置陰極端。板兩端分別用濕紗布與緩沖液相連，通電30分鐘。觀察：在相應(yīng)抗原

5、、抗體孔間出現(xiàn)沉淀線。18對流免疫電泳方法打孔加樣電泳35min－＋AgAbAgAb4~5mm4~5mm>5mm>5mm陰性陽性標(biāo)1陰性標(biāo)2陽性19對流免疫電泳結(jié)果判定：在相應(yīng)抗原抗體孔之間可見白色沉淀線。2021直接凝集反應(yīng)——玻片凝集材料：玻片1張/1人，1號(hào)、2號(hào)菌落，生理鹽水，診斷血清，接種環(huán)方法：取生理鹽水3～4環(huán)，菌落1～2環(huán)，后加血清2環(huán)輕搖玻片，1～2分鐘后觀察結(jié)果判定：出現(xiàn)乳白色凝集塊屬陽性反應(yīng)*玻片扔在后面的玻片缸里*消毒水泡手生理鹽水＋1號(hào)菌落生理鹽水+1號(hào)菌落＋診斷血清22實(shí)驗(yàn)報(bào)告五張圖：淋轉(zhuǎn)、E花環(huán)、單擴(kuò)、雙擴(kuò)、火箭電泳原理

6、及結(jié)果：對流免疫電泳、玻片凝集（結(jié)果可用圖示）23