南醫(yī)大微免實(shí)驗(yàn)三.ppt

《南醫(yī)大微免實(shí)驗(yàn)三.ppt》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。

1、微生物與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)（三）血清學(xué)反應(yīng)（二）：錄像：免疫標(biāo)記技術(shù)操作：ELISA示教：免疫熒光（C301）細(xì)菌學(xué)總論：細(xì)菌基本形態(tài)、特殊結(jié)構(gòu)操作：革蘭染色（三）補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)方法：待檢系統(tǒng)：Ag（未知）+Ab（已知）+補(bǔ)體指示系統(tǒng)：綿羊紅細(xì)胞（Ag）＋溶血素（Ab）結(jié)果：溶血——陰性不溶血——陽(yáng)性（四）中和反應(yīng)（neutralization）病毒中和試驗(yàn)毒素中和試驗(yàn)（五）免疫標(biāo)記技術(shù)將已知抗體標(biāo)記上顯示性物質(zhì)，通過(guò)檢測(cè)標(biāo)記物，反映有無(wú)抗原抗體反應(yīng)，從而間接測(cè)出微量的抗原或抗體。常用的標(biāo)記物有：酶、熒光素、放射性同位素、膠體金、生物素、電子致密物等。免疫熒光技術(shù)（熒光抗體技術(shù)）【原理】是在免疫學(xué)

2、、生物化學(xué)及顯微鏡術(shù)進(jìn)展的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)技術(shù)，具有特異、敏感、快速的特點(diǎn)。將熒光色素（常用異硫氰基熒光黃，簡(jiǎn)稱FITC）與特異性抗體（或抗原）以共價(jià)鍵基團(tuán)牢固結(jié)合，但不影響該血清抗體的免疫特性。這種熒光標(biāo)記的抗原抗體復(fù)合物，可通過(guò)熒光燈源中產(chǎn)生的紫外光或藍(lán)紫光激發(fā)產(chǎn)生熒光，而從熒光顯微鏡加以觀察?！痉椒ā恐饕兄苯臃ê烷g接法。免疫熒光酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）（EnzymelinkedlmmunosorbentAssay）【原理】把抗原抗體的免疫反應(yīng)和酶（主要有辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶等）的高效催化作用有機(jī)地結(jié)合起來(lái)，并仍保持其免疫和酶的活性。結(jié)合在抗原抗體復(fù)合物上的酶在遇

3、到相應(yīng)的底物時(shí)，可以催化底物水解、氧化或還原，從而產(chǎn)生有色的物質(zhì)。顏色反應(yīng)的深淺與抗體或抗原的量成正比。【方法】主要有間接法和雙抗體夾心法。ELISA：間接法------用于測(cè)定抗體ELISA：雙抗體夾心法------用于測(cè)定抗原ELISA：雙抗體夾心法檢測(cè)尿HCG器材：1個(gè)小杯/人，標(biāo)本1、標(biāo)本2A、B、C液方法：小杯內(nèi)加標(biāo)本兩滴甩干、水洗三次加一滴C液（紅色）甩干、水洗三次加A、B液各一滴置于白紙上，觀察結(jié)果結(jié)果判斷：藍(lán)色為陽(yáng)性*瓶蓋不能蓋錯(cuò)，小杯用后扔進(jìn)雜物盆！5min5min細(xì)菌總論（一）革蘭染色法：1884年Gram創(chuàng)建，是細(xì)菌學(xué)中最為經(jīng)典的染色法。意義：對(duì)細(xì)菌鑒別、選擇抗菌藥

4、物、研究細(xì)菌致病性等有重要意義。原理：與細(xì)菌細(xì)胞壁有關(guān)，尚未完全闡明。細(xì)菌的基本形態(tài)細(xì)菌是一類具有細(xì)胞壁的單細(xì)胞微生物，形體微小，一般以微米（μm）作為測(cè)量單位。細(xì)菌按其外型可分為球菌、桿菌、螺型菌三大類。不同種類的細(xì)菌大小不一，大多數(shù)球菌直徑約1μm，桿菌長(zhǎng)2～5μm，寬0.3～1μm。球菌（coccus）桿菌（bacillus）螺形菌（spiralbacterium）弧菌：一個(gè)彎曲螺菌：多個(gè)彎曲細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)莢膜、鞭毛、芽胞、菌毛莢膜（Capsule）鞭毛（flagellum）芽胞（spore）革蘭染色操作步驟【涂片】取載玻片接種環(huán)取混合菌液1-2環(huán)涂片（直徑約1cm）自然干燥固定（

5、通過(guò)火焰三次）【染色】結(jié)晶紫1min水洗碘液1min水洗酒精脫色30S水洗稀釋復(fù)紅1min水洗吸水紙印干油鏡觀察*注意無(wú)菌操作！有菌玻片放在水池旁玻片缸內(nèi)!作業(yè)：1、作圖—細(xì)菌基本形態(tài)、特殊結(jié)構(gòu)2、ELISA：原理、方法、結(jié)果、結(jié)論3、革蘭染色：方法、結(jié)果（圖示）作圖請(qǐng)注意大小比例、標(biāo)注