南醫(yī)大微免實驗六.ppt

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1、微生物與免疫學實驗（六）主要內(nèi)容一、操作：肥達試驗二、示教：腸道桿菌霍亂弧菌炭疽桿菌厭氧性細菌肥達試驗原理：用已知的傷寒沙門菌菌體（O）抗原和鞭毛（H）抗原，以及引起副傷寒的甲型副傷寒沙門菌、乙型副傷寒沙門菌H抗原的診斷菌液與受檢血清做試管或微孔板凝集實驗，測定受檢血清中有無相應(yīng)抗體及其效價的試驗。操作：肥達試驗（試管凝集反應(yīng)）器材：試管6支/人，試管架1個/4人吸管1支/人，標簽1個/人已知：傷寒H抗原、O抗原（4人/組）甲型副傷寒H抗原乙型副傷寒H抗原待檢：病人血清（1:10稀釋）0.5ml生理鹽水1234560.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.

2、5ml0.5ml血清1：401：801：1601：3201：640對照加菌液0.5ml/管（6→1），震蕩混勻，43℃水浴1.5h，觀察結(jié)果腸道桿菌（G—）腸道桿菌的鑒定標本增菌培養(yǎng)接種SS平板雙糖鐵培養(yǎng)基初步鑒定其他生化反應(yīng)鑒定血清學鑒定有菌可疑的乳白色菌落SS培養(yǎng)基膽鹽枸櫞酸鹽煌綠乳糖蛋白胨中性紅抑制雜菌生長被非致病菌分解產(chǎn)酸被致病菌分解產(chǎn)堿酸：紅堿：黃雙糖鐵培養(yǎng)基上層（固體）下層（半固體）乳糖硫酸亞鐵酚紅葡萄糖生化反應(yīng)表葡乳麥甘蔗H2S尿素靛大腸---痢疾------傷寒--/+--變形-----炭疽桿菌：G＋粗大桿菌，兩端平切、排列呈竹節(jié)狀；有莢膜，

3、芽胞呈橢圓形，位于菌體中央30~35℃，普通瓊脂培養(yǎng)基上形成灰白色粗糙型菌落，邊緣不整齊，在低倍鏡下觀察呈卷發(fā)狀炭疽桿菌培養(yǎng)物霍亂弧菌：G-，一個彎曲厭氧芽胞梭菌破傷風梭菌肉毒梭菌產(chǎn)氣莢膜梭菌破傷風梭菌：庖肉培養(yǎng)基、毒素動物試驗產(chǎn)氣莢膜梭菌：血平板（靶樣溶血）、庖肉培養(yǎng)基高層瓊脂斷裂試驗、洶涌發(fā)酵試驗肉毒梭菌：庖肉培養(yǎng)基第6管均勻混濁＋少量凝集＋＋細菌部分沉于管底，液體半澄清，凝集呈顆粒狀＋＋＋大部分凝集，液體輕度混濁，凝集塊較大＋＋＋＋全部凝集，液體澄清，大片凝集塊以出現(xiàn)＋＋凝集的血清最高稀釋倍數(shù)為該血清抗體效價O達到1:80，H達到1:160H甲或H乙達

4、到1:80或以上有診斷意義結(jié)果判斷血清稀釋度菌液1：401：801：1601：3201：640效價傷寒H傷寒O甲副H乙副H記錄結(jié)果*吸管放桶，試管放鍋實驗報告示教片：腸道桿菌、霍亂弧菌、炭疽桿菌破傷風梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌肥達試驗：原理、步驟、結(jié)果、分析