引物稀釋方法.docx

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1、引物稀釋方法PCR引物稀釋方法(-S為上游引物,-A為下游引物):1.按照管壁上的nmol數(shù)加入10倍的滅過菌的純化水稀釋成100nmol/mL2.各取上游引物(***-S)10uL,下游引物10uL加入到80uL滅過菌的純化水中稀釋成10nmol/mL3.取稀釋好的引物混合液2uL做PCR(25uL體系)定量PCR操作步驟參考(以FastStartUniversalSYBRGreenMaster(Rox)Roche為例)1)取0.2mlPCR管,配制如下反應(yīng)體系2×qPCRMix12.5μl7.5μM基因引物2.0μl反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物2.5μlddH2O8.0μl2)PCR擴增預變性95℃

2、,10min循環(huán)(40次)95℃,15s→60℃,60s末段延伸60℃,5min溶解曲線75℃→95℃,每20s升溫1℃

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