DMEM培養(yǎng)基配制方法.doc

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1、自行配制DMEM的方法及說(shuō)明書這里是一份GIBCO的低糖DMEM粉劑配制說(shuō)明（普通高糖的DMEM培養(yǎng)基配法是一樣的）：TOPREPARE1*LIQUID1.Measrueout5%lessdistilledwaterthandesiredtotalvolumeofmediumusingamixingcontainerthatisasclosetothefinalvolumeaspossible.2.Addpowderedmediumto15to30℃(roomtemperature)waterwithgentlestirring.(Donotheatwater)3.Rinseo

2、utinsideofpackagetoremovealltracesofpowder.4.Add3.7gofNaHCO3perliterofmedium.5.Dilutetoadesiredvolumewithwater.Stiruntildissolved.(Donotover-mix)6.AdjustpHofmediumto0.2-0.3belowdesiredfinalworkingpH*useofINNaOHorINHClisrecommended.(Addslowlywithstirring)AfterpHhasbeenadjustedkeepcontainerclo

3、seduntilmediumisfiltered.7.Sterilizeimmediatelybymembranefiltration.(Positivepressurerecommended)*pHunitewillusuallyrise0.1-0.3uponfiltration.另外，在李玲、李雪峰編著的《細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》中配制方法如下：1制備新鮮三蒸水或Millipore超純水。2稱取所需量的干粉培養(yǎng)基，加入約終體積一半的三蒸水中；若配制一個(gè)包裝的培養(yǎng)液，在將整個(gè)包裝的干粉倒入三蒸水后，需用水洗包裝袋內(nèi)面2次，倒入培養(yǎng)液中，以保證所有干粉都溶解成培養(yǎng)液。磁力攪拌或人工攪拌

4、使之完全溶解。3根據(jù)包裝袋上的要求補(bǔ)加所需量的碳酸氫鈉；根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，添HEPES（5-20mmol/L）、谷氨酰胺和其他特殊物質(zhì)。4加水定容到終體積。5必要時(shí)用1mol/L鹽酸和1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH。6用無(wú)菌0.22um濾膜過(guò)濾除菌，分裝于無(wú)菌血清瓶中，4℃冰箱保存。配制好的培養(yǎng)液用前加入100U/mL青霉素和100U/mL鏈霉素，并根據(jù)需要加入血清（5%-20%）。