實(shí)驗(yàn)五 DMEM培養(yǎng)液的配制.ppt

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1、實(shí)驗(yàn)五DMEM培養(yǎng)液的配制【能力目標(biāo)】熟練掌握DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液的配制。500mL大燒杯玻璃棒250mL/500mL鹽水瓶酸度計(jì)50mL小燒杯3個(gè)孔徑0.22μm微孔濾膜一次性濾器一次性濾紙去離子水滅活的小牛血清DMEM干粉青霉素鏈霉素NaHCO3超凈工作臺(tái)磁力攪拌器電子天平藥匙【實(shí)驗(yàn)材料】DMEM干粉1瓶(1,000mL量)NaHCO33.7gL-谷氨酰胺0.2g超純水1,000mL【配方】取清洗干凈的500mL大燒杯一個(gè)，加入新鮮制備的三蒸水約300mL，加熱至15~30℃；將DMEM干粉袋豎立輕彈，使袋中粉下沉，剪開(kāi)袋口

2、，將干粉倒入500mL的大燒杯中，用超純水沖洗袋2~3次；放入清洗干凈的磁子，在磁力攪拌器充分?jǐn)嚢?，以確保培養(yǎng)基干粉充分溶解；【配制方法】根據(jù)配方要求，加入準(zhǔn)確稱(chēng)取的NaHCO31.85g，L-谷氨酰胺0.1g，充分搖勻至完全溶解；加入已經(jīng)制備好的雙抗溶液，使青霉素和鏈霉素的最終使用濃度達(dá)到100μg/mL；加入培養(yǎng)基總體積約10％的已滅活的小牛血清；【配制方法】用濃度為7.4％的NaHCO3溶液調(diào)整溶液的pH值為7.2~7.4，加超純水定容，并將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入鹽水瓶；用一次性濾器過(guò)濾上述培養(yǎng)液到滅菌的鹽水瓶，封口，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

3、【配制方法】實(shí)驗(yàn)五1MHCl的配制1MNaOH的配制250mL燒杯玻璃棒250mL鹽水瓶一次性濾紙去離子水電子天平藥匙5mL移液器5mL吸頭NaOH濃HCl【實(shí)驗(yàn)材料】用5mL的移液器準(zhǔn)確移取鹽酸21mL，加入到279mL超純水中?！綡Cl的配制過(guò)程】【NaOH的配制過(guò)程】NaOH10g超純水250mL邊加邊攪拌，溶解過(guò)程會(huì)產(chǎn)熱?！菊n程安排】1、每組確定本組的D-Hank’s液是否有？是否已過(guò)濾除菌；2、每組的EDTA需要高壓滅菌；3、需要配制新鮮的1MHCl和1MNaOH溶液，以及7.4％的NaHCO3溶液；4、需要重新滅菌

4、5mL槍頭；5、每組準(zhǔn)備一鋁飯盒，內(nèi)放小剪刀一把，小鑷子一把，手術(shù)鉗一把，大剪刀一把，高壓滅菌；【課程安排】6、每組準(zhǔn)備培養(yǎng)皿兩套，干烤滅菌；7、需要重新配制雙抗溶液。