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《血液樣本的采集與保存.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、實(shí)用帖｜血液樣本的采集與保存在脊椎動(dòng)物中，外周血一直被認(rèn)為是侵害性較小、富有價(jià)值的檢測(cè)樣本。在許多生物樣本庫中，由于血液樣本的常規(guī)收集、處理及保存方法簡(jiǎn)便、成本低且富含可利用成分和生物分子，因此是進(jìn)行多種項(xiàng)目分析的理想實(shí)驗(yàn)材料。然鵝，科研僧們歷經(jīng)千辛萬苦最后發(fā)現(xiàn)獲得的血液樣本RNA降解了。。。。額，這就很惆悵了。所以呢，在樣本采集、處理及儲(chǔ)存過程中必須格外注意，從根本上確保獲得高質(zhì)量的RNA。今天小編和大家一起來聊一聊在進(jìn)行RNA實(shí)驗(yàn)時(shí)血液樣本如何進(jìn)行收集與保存。血液的組成首先來熟悉一下血液的組成。人類的血液由血漿和血細(xì)胞組成。其中血漿
2、約占血液的55%，是水，糖，脂肪，蛋白質(zhì)，鉀鹽和鈣鹽等的混合物。血細(xì)胞約占血液的45%，主要分為紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板。而哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞和血小板是無核的。血漿和血清血漿是離開血管的全血經(jīng)抗凝處理后，通過離心沉淀，所獲得的不含細(xì)胞成分的液體，其中含有纖維蛋白原，不含游離的Ca2+，若向血漿中加入Ca2+，血漿會(huì)發(fā)生再凝固。血清是離體的血液凝固之后，經(jīng)血凝塊聚縮釋出的液體，其中已無纖維蛋白原，但含有游離的Ca2+，血清中少了很多的凝血因子但多了很多的凝血產(chǎn)物。采血管的選擇采血管，大家都不陌生，去醫(yī)院抽個(gè)血，一定會(huì)用到采血管，那么問題來
3、鳥，這么多顏色的采血管，有什么區(qū)別呢？下面小編來給大家介紹一下采血管的分類及不同顏色試管帽代表的含義。1.藍(lán)色頭蓋管（含有檸檬酸鈉抗凝劑的采血管）2.黑色頭蓋管(含有0.109mol/L檸檬酸鈉)3.紫色頭蓋管(含有乙二胺四乙酸以及其鹽的采血管)4.綠色頭蓋管（肝素抗凝管）5.灰色頭蓋管(含有草酸鉀/氟化鈉）6.橘紅色頭蓋管（促凝管）7.金黃色頭蓋管（含有惰性分離膠及促凝劑的采血管）8.紅色頭蓋管（無添加劑的干燥真空管）?抗凝劑有很多種，原理包括螯合鈣、抑制蛋白酶和抑制血小板活化等。雖然有這么多抗凝劑可供選擇，但不建議使用肝素抗凝劑，因
4、為肝素會(huì)同引物和酶競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合核酸，影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。所以對(duì)于血清樣本，采血管推薦使用黃蓋采血管（促凝管或促凝管帶分離膠）。血漿樣本，采血管推薦使用紫蓋采血管（EDTA-K2或EDTA-K3）。血液總RNA的提取目前對(duì)血液總RNA的提取，前期處理主要分為紅細(xì)胞裂解法及淋巴細(xì)胞分離法。兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)。由于紅細(xì)胞裂解法操作簡(jiǎn)單，能獲得幾乎所有白細(xì)胞的RNA，因此這種方法被廣泛使用。對(duì)于血液RNA的抽提,除了采用傳統(tǒng)Trizol進(jìn)行抽提之外，市面上也涌現(xiàn)出各式各樣的試劑盒，如何在眾多的試劑盒中挑選出最適合自己的一款，也需要考驗(yàn)眼力哦！今天
5、小編給大家推薦一款比較好用的血液RNA提取試劑---TRIzol?LSReagent，比TRIzol還要好用哦！?。。ú⒉皇峭?，親測(cè)，好用。。。。）如何進(jìn)行取樣？全血樣本取樣方法全血樣本為盡可能縮短取樣時(shí)間，保證RNA質(zhì)量，建議使用抗凝采血管（不建議使用肝素抗凝管）采集全血。采血后輕輕倒轉(zhuǎn)采血管混合4~5次，使抗凝劑與血液混勻。將采集好的全血快速轉(zhuǎn)移至單獨(dú)的凍存管或離心管，按照每250ul/管分裝，加750ul(即三倍體積)的TrizolLS，混勻。液氮速凍后，放-80°C冰箱保存。長(zhǎng)期保存，可放入液氮。每個(gè)環(huán)節(jié)盡可能的快速完成，避免R
6、NA的降解。每個(gè)環(huán)節(jié)盡可能的快速完成，避免RNA的降解。還需要小伙伴們注意的是，保存全血所使用的凍存管或離心管，操作中使用的槍頭盒離心管等均需要RNase-free噠，裝好樣品后管口需要以封口膜封好，防止污染，分裝好的樣本做好標(biāo)記，避免混淆。血清樣本取樣方法血清樣本采用快速分離法建議使用橘黃色促凝采血管（可在5min內(nèi)使采集的血液凝固，適用于急診血清系列生化試驗(yàn)）采集全血，采血后輕輕倒轉(zhuǎn)采血管混合4~5次，使促凝劑與血液混勻。直立置于4℃待血液完全凝固，1000g離心10分鐘，分離血清。將采集的血清轉(zhuǎn)移至單獨(dú)的凍存管或離心管，按照每25
7、0μl/管分裝。液氮速凍后，放-80℃冰箱保存。長(zhǎng)期保存，可放入液氮。黃蓋采血管（促凝管或促凝管帶分離膠）
