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《海洋球石藻(Emiliania huxleyi)通用表達(dá)載體的構(gòu)建與電轉(zhuǎn)化.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、第３８卷第８期海洋學(xué)報(bào)Ｖｏ．ｌ３８，Ｎｏ．８２０１６年８月HａｉｙａｎｇＸｕｅｂａｏＡｕｇｕｓｔ２０１６王薛婷，郭強(qiáng)強(qiáng)，蔡藝欽，等．海洋球石藻（Emilianiahuxleyi）通用表達(dá)載體的構(gòu)建與電轉(zhuǎn)化［Ｊ］．海洋學(xué)報(bào)，２０１６，３８（８）：１０３—１１４，ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．０２５３-４１９３．２０１６．０８．０１１WａｎｇＸｕｅｔｉｎｇ，ＧｕｏＱｉａｎｇｑｉａｎｇ，ＣａｉＹｉｑｉｎ，ｅｔａｌ．Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒａｎｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｖｉａｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎｉｎｃｏｃｃｏｌｉｔｈ-ｏｐｈｏｒ
2、ｅEmilianiahuxleyi［Ｊ］．HａｉｙａｎｇＸｕｅｂａｏ，２０１６，３８（８）：１０３—１１４，ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．０２５３-４１９３．２０１６．０８．０１１海洋球石藻（Emilianiahuxleyi）通用表達(dá)載體的構(gòu)建與電轉(zhuǎn)化王薛婷１，郭強(qiáng)強(qiáng)１，蔡藝欽１，陳志福１，李?。保瑒㈧o雯１*（１．集美大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，福建廈門(mén)３６１０２１）摘要：海洋球石藻Emilianiahuxleyi是一種全球廣泛分布的真核浮游植物，該種不僅是海洋碳、硫循環(huán)和全球氣候變化的重要指示物種，而且能夠產(chǎn)生豐富的次級(jí)代謝生物活性物質(zhì)，在生物技術(shù)領(lǐng)域也具有很好的應(yīng)用前景
3、。本文通過(guò)分析氨芐青霉素、卡那霉素、Ｇ４１８、氯霉素、鏈霉素、新生霉素及嘌呤霉素等７種常用抗生素對(duì)海洋球石藻生長(zhǎng)的影響，確定Ｇ４１８可作為該藻陽(yáng)性轉(zhuǎn)化藻株的抗性篩選試劑，其對(duì)應(yīng)的抗性基因neo則作為該藻表達(dá)載體構(gòu)建中的抗性篩選標(biāo)記。在此基礎(chǔ)上克隆了綠色熒光蛋白基因gfp、抗性標(biāo)記基因neo及E．huxleyiBＯF９２內(nèi)源性巖藻黃素－葉綠素a／c結(jié)合蛋白基因的啟動(dòng)子fcp，以ｐＵＣ１８為基礎(chǔ)載體，構(gòu)建了ｐＵＣ１８-ｆｃｐ-ｇｆｐ和ｐＵＣ１８-ｆｃｐ-ｎｅｏ兩個(gè)重組表達(dá)載體，以電轉(zhuǎn)化方法共轉(zhuǎn)化球石藻細(xì)胞并結(jié)合選擇性固體培養(yǎng)基篩選，成功獲得了被轉(zhuǎn)化的球石藻細(xì)胞。海洋球石藻遺傳轉(zhuǎn)化系
4、統(tǒng)的建立為進(jìn)一步開(kāi)展該種相關(guān)的基礎(chǔ)生物學(xué)研究及其在生物技術(shù)領(lǐng)域的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：海洋球石藻；通用表達(dá)載體；neo標(biāo)記基因；電轉(zhuǎn)化中圖分類(lèi)號(hào)：Ｑ７８文獻(xiàn)標(biāo)志碼：Ａ文章編號(hào)：０２５３-４１９３（２０１６）０８-０１０３-１２海洋球石藻Emilianiahuxleyi是一種全球廣泛１引言分布且具有重要生態(tài)功能的真核微型浮游植物。其海洋微藻是海洋生物的重要餌料來(lái)源之一，具有獨(dú)特的生物礦化作用和高產(chǎn)ＤMSP能力已成為影響種類(lèi)多、繁殖快、數(shù)量大等特點(diǎn)，是海洋生物資源的重全球碳、硫生物地化循環(huán)及氣候變化的一個(gè)關(guān)鍵物［９］要組成部分。許多海洋微藻能夠產(chǎn)生豐富的次級(jí)代謝種。除此之外，該種
5、還能夠產(chǎn)生豐富的次級(jí)代謝生活性物質(zhì)，可用于食品、醫(yī)藥、能源及化工領(lǐng)域，特別是物活性物質(zhì)，在生物技術(shù)研究領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前有些海洋微藻細(xì)胞中總脂類(lèi)的含量可高達(dá)８０％（干質(zhì)景。如，能有效合成和累積Ω-３長(zhǎng)鏈多元不飽和脂肪量），在脂類(lèi)生物活性物質(zhì)及能源開(kāi)發(fā)利用中具有很好酸二十二碳六烯酸（ＤHＡ），具有防止心血管疾病等［１—４］的前景和優(yōu)勢(shì)。微藻遺傳工程是操縱微藻代謝通藥理功能；能夠合成大量聚酮類(lèi)化合物，具有良好的［１０—１１］路的強(qiáng)有力工具，利用基因工程改造微藻生物代謝途抗菌、抗蟲(chóng)、抗腫瘤等生物學(xué)活性。［５—８］徑，可大大提高目標(biāo)活性物質(zhì)的合成和積累。自然海域中，某些海洋球石藻E．
6、huxleyi能夠被收稿日期：２０１５-１２-１１；修訂日期：２０１６-０３-０３?；痦?xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金（４１５７６１６６）；福建省科技重點(diǎn)項(xiàng)目（２０１５Ｙ００３９）；廈門(mén)市南方海洋研究中心項(xiàng)目（１４ＧZP７１ＮF３５）。作者簡(jiǎn)介：王薛婷（１９９１—），女，山西省臨汾市人，主要從事海洋微生物分子生物學(xué)研究。E-ｍａｉｌ：ｘｕｅｔｉｎｇｗ１９９１＠１６３．ｃｏｍ*通信作者：劉靜雯（１９６５—），女，山西省太原市人，教授，主要從事海洋微生物資源開(kāi)發(fā)利用研究。E-ｍａｉｌ：ｌｊｗｓｂｃｈ＠１６３．ｃｏｍ，ｊｗｌｉｕ＠ｊｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ１０４海洋學(xué)報(bào)３８卷其特異的ｄｓＤＮＡ病毒
7、感染，且病毒感染和裂解被確氨芐青霉素、卡那霉素、Ｇ４１８、氯霉素、鏈霉素、新認(rèn)是終止該藻赤潮的一個(gè)重要因素。海洋球石藻E．生霉素、嘌呤霉素、Ｇ４１８、Ｘ-ｇａｌ（鷺隆生物科技有限公huxleyiＣＣMP１５１６及其特異性裂解病毒EｈＶ８６的司），EｘＴａｑ○ＲHｏｔSｔａｒｔＶｅｒｓｉｏｎ試劑盒，限制性?xún)?nèi)切全基因組測(cè)序注釋結(jié)果顯示，該藻擁有類(lèi)似于其他生酶（BamHⅠ、PstⅠ、SacⅠ、EcoＲⅠ、XbaⅠ）、Ｔ４ＤＮＡ連接物完整的鞘脂類(lèi)物質(zhì)生物合成途徑；而令人驚奇的酶、ｒＴａｑ酶、ＤＮＡｍ
